肝癌患者外周血T淋巴细胞亚群的测定及临床意义

作者:张晟晃;谭小宇;陈念平 刊名:中国医院用药评价与分析 上传者:鲁俊

【摘要】目的:分析肝癌患者外周血T淋巴细胞亚群水平的特点、影响因素及临床意义。方法:对50例肝癌患者外周血T淋巴细胞及NK活性进行检测,并测定了部分患者T淋巴细胞亚群变化,比较其与正常人群对照组的差别。结果:肿瘤患者二项指标均低于正常对照组,CD3+、CD4+细胞数减少,CD8+数增加,Th/Ts比例下降或倒置。结论:肝癌患者存在细胞免疫功能紊乱,检测肝癌患者外周血T淋巴细胞亚群的表达对评估患者的细胞免疫功能及疾病的预后具有一定的临床意义。

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肿瘤细胞的强侵袭性、转移性使机体的免疫监控系统失去作用[1],癌细胞及其局部微环境与机体的整体系统相互作用及细胞因子与肿瘤细胞的生长、转移关系密切。T淋巴细胞在机体的抗肿瘤免疫中起调节作用。在此过程中,T淋巴细胞的两个功能亚群具有调节整个机体免疫功能的作用,其数量、比例和功能的改变都可能影响着机体的免疫状态。癌症患者T细胞介导的细胞免疫均存在不同程度的紊乱与缺陷。本研究通过对50例肝癌患者T淋巴细胞及NK细胞活性检测,并测定其中部分患者T淋巴细胞亚群及其比例变化,以了解肿瘤患者细胞免疫功能与正常人群的差异,以及细胞免疫功能对肿瘤预后的影响。1材料与方法1.1检测标本肿瘤组取自本院住院的50例经病理证实的肝癌患者,年龄3069岁,平均45.428.19岁。对照组取自50名健康正常人,均排除心、肾、肺部疾患,年龄2541岁,平均年龄30.25.4岁。采用Ficoll密度梯度离心法分离外周血单个核细胞。分别无菌采集静脉血,在短中管中加入适量淋巴细胞分离液。取肝素抗凝静脉血与等量RPMI1640充分混匀,用滴管沿管壁缓慢叠加于分层液面上,注意保持清楚的界面。水平离心2000rpm20min。将中层分离液(单个核细胞)吸取出来洗涤后,以含10%小牛血清的RPMI-1640培养基调浓度5105.mL-1备用。1.2T淋巴细胞百分率检测用尼龙毛柱分析T细胞。(1)按照操作说明准备好尼龙毛柱备用。(2)分离细胞:取PBMC,用含10%小牛血清的RPMI1640培养液将细胞配成4107.mL-1。融化冻存的尼龙毛柱,以每分钟57滴的速度放出Hanks液。用5mL预温至37的细胞培养液洗涤尼龙毛柱。将0.5mL上述PBMC悬液加入尼龙毛柱中,待细胞悬液全部进入尼龙毛柱后,立即加0.2mL细胞培养液,夹住塑料管。在375%CO2饱和水汽二氧化碳培养箱中培养60min,使细胞与尼龙毛充分黏附。用5mL预温至37的细胞培养液洗脱尼龙毛柱。洗脱液中含有纯的T细胞。1000g离心洗脱液10min,去上清液。再用细胞培养液洗涤细胞1次。计数细胞,计算出T淋巴细胞百分率。1.3T淋巴细胞亚群检测采用流式细胞术(FCM)检测外周血中的T淋巴细胞亚群。试剂:美国Couter公司进口试剂,包括CD4-FITC/CD8-PE/CD3-Percp三色标记的单克隆抗体。仪器:美国Couter公司EpicsXl型流式细胞仪。取CD4-FITC/CD8-PE/CD3-Percp三色标记的单克隆抗体0.02mL加入试管管底,加入待检验的经EDTA钾盐抗凝的全血0.05mL,混匀,避光室温下染色15min。然后加入OptilyseC溶血素0.5mL,充分混合后立即上机检测。1.4数据处理统计学处理采用t检验法,检测结果以均数标准差表示。利用SPSS10.0处理试验结果。2结果肝癌患者外周血T淋巴细胞亚群检测结果,见表1。肿瘤组与对照组比较,P<0.05。表1肝癌患者外周血T淋巴细胞亚群检测结果(%,n=50,-xs)Tab1DetectionresultsofTlymphocytesubgroupinperipheralbloodinpatientswithlivercancer(%,n=50,x-s)组别T淋百巴分细率胞CD3+CD4+CD8+CD4+/CD8+肿瘤组376..0343453..0261238..5482249..312500..1979对照组647..2438647..3547520..1512224..85301..83253讨论研究证实,恶性肿瘤患者常伴有免疫功能障碍。肿瘤免

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