烟草根围土壤对主要烟草病害的拮抗放线菌株筛选及其鉴定

作者:陈国康;陈世春;肖崇刚;王岩 刊名:西南大学学报(自然科学版) 上传者:胡继红

【摘要】从采自我国烟草主要产区的38份土壤样品中分离获得放线菌296株.采用平板对峙培养法从中筛选出对烟草青枯病菌(Ralstonia solanacearum)和黑胫病菌(Phytophthora parasitica var.nicotianae)有拮抗活性的菌株227株,其中对青枯病菌拮抗活性较高的YYD3-17、YYD3-19、YYD3-29、YYD3-32和HLL4-9菌株抑菌圈直径达45mm以上;对黑胫病菌拮抗活性较高的BXⅡ3-1、BXⅡ5-4、BXⅡ5-5、BXI21-1和YYD1-4菌株抑菌圈直径达25mm以上.依据前人的研究成果,对这10株放线菌进行初步鉴定,结果显示它们均属于链霉菌属(Strepto-mycesspp.).其中YYD3-17、YYD3-19、YYD3-29和YYD3-32属于灰红紫类群;BXⅡ3-1、BXI21-1同属于吸水类群;而BXⅡ5-4、BXⅡ5-5、YYD1-4和HLL4-9分属白色亚群、白孢亚群、金色亚群和绿色亚群.BXⅡ5-4和BXⅡ5-5分别被鉴定为白色链霉菌种(S.albus)和阿布拉链霉菌种(S.aburviensis).

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烟草青枯病(Ralstoniasolanacearum)和烟草黑胫病(Phytophthoraparasiticavar.nicotianae)是烟草上除烟草病毒病以外发生最普遍、危害最严重的侵染性病害,传播方式以土壤传播为主.传统的化学防治方法难以取得明显的防效,且易造成环境污染.在当前国家提出无公害农业、绿色植保的可持续发展战略大背景下,利用土壤有益微生物资源进行病害防治,因其对环境无污染、适于防治土传病害[1]而呈现出良好的研究与发展前景.蔡艳等[2]对温室中辣椒健株和病株根际土壤放线菌的研究表明,健株根际土壤拮抗放线菌数量及其占放线菌总数的比例均高于病株.而决定辣椒是否染病的关键因素之一,是根际土壤中拮抗放线菌的数量水平和群落结构.因此,从土壤中筛选拮抗放线菌,再将其发酵增殖后回施土壤,可取得对土传病害的有效治理[3].本研究从采自我国烟草主产区发生青枯病或黑胫病烟田健株根围的38份土壤样品中,分离筛选对烟草青枯病、黑胫病有拮抗活性的放线菌菌株,并对拮抗性优良的放线菌进行鉴定及分类,为深入研究放线菌株的拮抗机理及其开发应用奠定科学基础.1材料与方法1.1材料1.1.1土壤样品土壤样品采集自重庆、贵州、云南、河南、四川、山东等几个烟草主产区,共38份.1.1.2供试病原菌本实验采用烟草黑胫病菌(Phytophthoraparasiticavar.nicotianae)、烟草青枯病菌(Ralstoniaso-lanacearum)作为指示病原菌进行拮抗实验.以上菌种均由重庆西南大学植物生态病理研究所提供.1.1.3培养基放线菌分离培养基采用高氏合成一号培养基,筛选培养基采用PDA培养基.鉴别培养基采用国际链霉菌计划(ISP)[4]指定的4种培养基及高氏合成1号培养基、Czapck培养基、马铃薯浸汁培养基.1.2方法1.2.1土样采集方法在发生青枯病或黑胫病较重的烟田,取未感病的健康烟株根系周围土样,拨除表层土壤后在深度为515cm的耕层取样,将其分装于采样袋,贴标签标记并编号.1.2.2拮抗放线菌的分离方法将风干的土样研磨成粉,40下热处理1h.无菌条件下,45mL无菌水稀释5.0g土样(即10-1g/mL),振荡30min后,无菌水梯度稀释至10-3g/mL,吸取0.1mL土壤稀释液,涂布于加有75g/mL重铬酸钾的高氏合成1号培养基平板上,3次重复.28培养7d后挑取菌落形态差异明显的单菌落编号并转入高氏合成1号斜面,28培养7d左右,4冰箱保存备用[5].1.2.3拮抗放线菌的筛选方法分别采用平板喷雾法和平板对峙法[6]来筛选对烟草青枯病菌和烟草黑胫病菌有拮抗活性的放线菌,记录其编号.1.2.4拮抗放线菌的鉴定方法依据阎逊初[7]编著的《放线菌的分类和鉴定》,对拮抗放线菌进行初步鉴定与分类.国际链霉菌计划(ISP)所指定的7种培养基为:4种鉴别培养基(编号ISP-2、ISP-3、ISP-4、ISP-5),高氏合成1号培养基,Czapck培养基和马铃薯浸汁培养基.将拮抗放线菌分别在上述7种培养基上培养7d后,观察其菌落整体形态、气生菌丝、基内菌丝、孢子及可溶性色素的有无及颜色等[8].同时,在高氏合成1号培养基上采用插片法观察菌丝形态及孢子链特征[9].2结果与分析2.1菌株的分离与筛选从38份烟草根围土样中分离获得放线菌296株,筛选得到对烟草青枯病菌有拮抗活性的放线菌89株,对烟草黑胫病菌有拮抗活性的放线菌138株,对2种病原菌均有拮抗活性的放线菌62株(表1).表1放线菌对烟草青枯病菌、黑胫病菌的抑菌作用抑菌圈半径/mm烟草青枯病菌

参考文献

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