铁皮石斛茎段丛生芽的增殖培养研究

作者:姜殿强;潘梅;黄赛;云勇 刊名:安徽农业科学 上传者:邓金霞

【摘要】[目的]研究铁皮石斛茎段丛生芽的最适增殖培养方式。[方法]以铁皮石斛茎段为外植体,研究不同基本培养基、植物生长调节剂种类和浓度、有机添加物及培养时间对铁皮石斛丛生芽增殖的影响。[结果]MS培养基优于1/2MS、B5和N6;香蕉对丛生芽的分化有明显的促进作用;培养60 d时丛生芽的增殖倍数最高,生长势好。[结论]丛生芽的最佳增殖培养基为MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.5mg/L+香蕉100 g/L+活性炭0.5 g/L,培养时间以60 d为宜。

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铁皮石斛(DendrobiumcandidumWall.exLindl.),俗称铁皮枫斗,又称黑节草,属兰科石斛属多年生草本附生植物,是我国传统名贵珍稀中药材和较好的室内观赏植物。其具益胃生津、滋阴清热等功效,并以其味甘、质重、柔韧和黏性大而被视为药材珍品,《中华人民共和国药典》(2010)将其从石斛药材中单列出来。铁皮石斛生长缓慢、自身繁殖能力很低,但其市场用量非常大,价格较高,因此出现了人为的过度采挖和破坏生境,至今野生铁皮石斛已濒临灭绝。铁皮石斛早已被列为国家重点保护药用植物、中国珍稀濒危二级保护植物和世界二类保护植物,并被列入中国植物保护红皮书[1]。组织培养规模化育苗已在许多濒危物种上取得了成功,运用组织培养技术对铁皮石斛进行规模化生产,对解决环境破坏和铁皮石斛种质资源保护都有重要现实意义。笔者用铁皮石斛茎段为外植体,对基本培养基、植物生长调节剂种类和天然附加物对铁皮石斛丛生芽增殖的影响进行研究,以提高铁皮石斛在组织培养中的诱导率和增殖率,为其规模化育苗提供依据。1材料与方法1.1材料云南野生铁皮石斛苗,由云南文山州杏林生物科技开发有限责任公司提供。1.2方法1.2.1外植体的选取和预处理。选取生长旺盛的铁皮石斛健康植株,以茎芽为中心剪下,芽的上下各留1.0cm的茎段,用洗衣粉浸泡20min左右,取出后再用自来水反复冲洗数次备用。1.2.2外植体的灭菌。将预处理过的外植体用75%酒精溶液灭菌20s,用无菌水冲洗3次,将茎段腋芽的苞叶剥去,然后用0.1%HgCl2溶液灭菌10min,最后用无菌水冲洗6次,接种到诱导培养基上。1.2.3培养基的灭菌。所有培养基均添加蔗糖30g/L,活性炭0.5g/L,卡拉胶6.0g/L,pH5.8,培养基分装后,放入高压灭菌锅中于121、0.14MPa下高温高压灭菌20min。1.2.4培养条件。所有材料均在组织培养室中培养,温度为25,光照强度为15002000lx,光照时间9h/d。1.2.5培养过程及方法。将消毒好的茎段切除上下端各0.5cm后接种于培养基MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L中诱导腋芽发生,约45d后形成丛芽,选取生长一致的丛生芽切成单苗接入各处理培养基中,比较基本培养基、植物生长调节剂、天然有机添加物及培养时间对铁皮石斛丛生芽增殖的影响,每处理接种10瓶,每瓶8个材料,3次重复,定期观察生长状况,60d后统计增殖倍数。2结果与分析2.1不同基本培养基对铁皮石斛丛生芽增殖的影响将小苗接入分别添加了6-BA2.0mg/L和NAA0.2mg/L的MS、1/2MS、B5和N64种基本培养基中。培养20d后,其基部开始分生出小芽。从表1可看出:MS培养基对丛生芽的增殖效果最好,芽的增殖倍数最大,为5.10倍,且芽苗生长势好,叶色浓绿。表1基本培养基对铁皮石斛丛生芽增殖的影响基本培养基外植体数分株数增殖倍数MS804085.101/2MS803284.10B5803023.78N6803424.28注:表中数据为培养60d后统计得到。2.26-BA浓度对铁皮石斛丛生芽增殖的影响在MS基本培养基中分别添加6-BA0.5、1.0、2.0、3.0mg/L和NAA0.5mg/L,接种小苗培养。由表2可看出,在NAA浓度0.5mg/L及添加物不变的情况下,当6-BA的浓度为2.0mg/L时平均增长的芽数最多,达5.30。由此可见当6-BA的浓度为2.0mg/L,NAA的浓度为0.5mg/L时,铁皮石斛丛生芽的增殖效果最好。表2不同浓度6-BA对铁皮石斛丛生芽增殖的影响6-BAmg/L外植体数

参考文献

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