SNS-032诱导弥漫性大B淋巴瘤OCI-LY-19细胞株凋亡及其作用机制的研究

作者:师宪平;蓝晓莹;温创宇;陈鑫;刘焕亮;黄美近 刊名:中国病理生理杂志 上传者:姜金龙

【摘要】目的:研究SNS-032对弥漫性大B淋巴瘤细胞株OCI-LY-19凋亡的影响并探讨其作用机制。方法:应用MTS法观察不同浓度的SNS-032对OCI-LY-19细胞活力的影响;用PI单染法观察SNS-032对OCI-LY-19细胞诱导死亡的影响;Annexin V/PI双染流式细胞术分析不同浓度SNS-032对OCI-LY-19细胞凋亡的影响;Western blotting检测细胞凋亡相关蛋白和细胞增殖相关蛋白的表达情况。结果:SNS-032明显抑制OCI-LY-19细胞活力,半数抑制浓度为0.358μmol/L;随SNS-032作用时间延长与浓度升高,凋亡细胞数逐渐增多;SNS-032可以时间与剂量依赖性地引起凋亡相关蛋白聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶(PARP)的切割,caspase-3前体(procaspase-3)、caspase-9前体(procaspase-9)、X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)与髓样细胞白血病1(Mcl-1)的表达下降,而cleavedcaspase-3和cleaved caspase-9表达明显增加;与细胞增殖相关的蛋白丝/苏氨酸激酶(Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)、信号转导子及转录激活子5(STAT5)、磷酸化STAT5(p-STAT5)、细胞外信号调节激酶(ERK)和磷酸化ERK(p-ERK)表达下降,而ERK总蛋白无明显变化。结论:SNS-032能抑制弥漫性大B淋巴瘤细胞株OCI-LY-19的生长,诱导其凋亡,可能的机制是抑制了相关抗凋亡蛋白的表达,激活了caspase级联反应,同时抑制了与细胞增殖相关的JAKs/STATs、MEK/ERK和PI3K-Akt信号转导通路的表达与活化。

全文阅读

非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkinlymphoma,NHL)是目前发病率增长最快的恶性肿瘤,其中弥漫性大B淋巴瘤(diffuselargeB-celllymphoma,DLBCL)是最常见的NHL。DLBCL是大B型淋巴细胞弥漫性恶性增生性疾病,在最近的1020年间发病率逐渐增加。DLBCL在西方国家占成人非霍奇金淋巴瘤30%40%,在发展中国家高达60%。按照肿瘤细胞来源和临床表现DLBCL分为生发中心B细胞样弥漫性大B细胞淋巴瘤(germinalcenterBcell-likediffuselargeB-celllymphoma,GCB-DLBCL)、活化性B细胞样弥漫性大B细胞淋巴瘤(activatedBcell-likediffuselargeB-celllymphoma,ABC-DLBCL)和原发性纵膈B细胞淋巴瘤(primarymediastinalB-celllymphoma,PMBL)3型。迄今,利妥昔单抗联合CHOP方案(rituximabplusCHOP,R-CHOP;利妥昔单抗联合环磷酰胺、阿霉素、长春新碱和强的松)被国际上公认为治疗侵袭性NHL的经典疗法,在治疗低度恶性NHL特别是GCB型DLBCL取得了良好的效果。然而在用药过程中产生了极大的耐药复发问题及并发症(支气管痉挛、心律失常、肝功能衰竭、呼吸困难等),严重影响了治疗效果[1],迫切需要筛选出作用机制各异的有效化合物治疗DLBCL。SNS-032(BMS-387032)是一种新型的氨噻唑化合物,因其对细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶(cyclin-dependentkinase,CDK)的活性具有抑制作用,最初被定义为CDK2、7、9的抑制剂[2]。已有报道证明SNS-032可用于多种肿瘤,如急性粒细胞性白血病(acutemyelogenousleukemia,AML)[3]、慢性淋巴性白血病(chroniclymphocyticleukemia,CLL)[4]、多发性骨髓瘤(multiplemyeloma,MM)、结肠癌、非小细胞肺癌(non-smallcelllungcancer,NSCLC)等[5-6]的治疗,目前该化合物已处于CLL、MM及其转移性难治性实体瘤的I期临床试验阶段。本研究以GCB-DL-BCL细胞株OCI-LY-19为研究对象,观察SNS-032对OCI-LY-19细胞的抗肿瘤活性,并分析其可能的作用机制,以期探讨该化合物在弥漫性大B淋巴瘤治疗中的潜在应用价值。材料和方法1材料OCI-LY-19细胞株购自中国医学科学院血液学研究所。胎牛血清购自HyClone。RPMI-1640培养基购自Gibco。MTS购自Promega。碘化丙啶(pro-pidiumiodide,PI)和AnnexinV细胞凋亡检测试剂盒购自Sigma-Aldrich。抗聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶[poly(ADP-ribose)polymerase,PRAP]、含半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3、9前体(procaspase-3和pro-caspase-9)、含半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3、9切割体(cleavedcaspase-3和cleavedcaspase-9)、蛋白丝/苏氨酸激酶(proteinserine/threoninekinase,Akt)、p-Akt、细胞外信号调节激酶(extracellularsig-nal-regulatedkinases,ERK)和p-ERK抗体为CellSignaling产品。抗髓样细胞白血病1(myeloidcellleukemia

参考文献

引证文献

问答

我要提问