糖尿病并脑梗死大鼠模型的建立体会

作者:王海涛;杨明峰;孙保亮;曹晓岚 刊名:中西医结合心脑血管病杂志 上传者:傅千里

【摘要】目的建立糖尿病并脑梗死大鼠模型,并总结经验教训。方法选用5周龄的Spraque-Dawley(SD)大鼠,进行高脂高糖饲料喂养4周,腹腔注射链脲佐菌素(STZ),诱导大鼠糖尿病模型,1周后测定大鼠血糖水平,筛选糖尿病造模成功的大鼠,进行线栓法大脑中动脉阻塞(MCAO)建立脑梗死模型,采用神经功能缺损(NSS)评分、TTC染色与HE染色观察神经功能缺损、脑梗死体积及病理改变。结果高脂、高糖饮食4周注射STZ后,再用线栓法行MCAO能成功复制糖尿病并脑梗死模型。结论高脂膳食结合STZ注射能复制出2型糖尿病动物模型,是研究人类糖尿病脑梗死病理过程较为理想的动物模型。

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随着社会人口老龄化及生活方式的改变,糖尿病的患病率呈逐年上升趋势,严重威胁人类健康。临床上反复发作的缺血性脑卒中患者10%30%合并有糖尿病;缺血性脑卒中死亡病人中,糖尿病是非糖尿病病人的2倍或以上。因此糖尿病与脑缺血的关系日益受到人们的重视。糖尿病合并脑梗死时脑损伤机制亟需满意的动物模型来模拟实际的发病情况,目前,国外用于糖尿病研究的动物模型多为遗传型[1],如ob/ob小鼠、db/db小鼠及肥胖型Zucker大鼠、OLETF大鼠等,其来源在我国相当困难且十分昂贵,不利于研究的开展。国内有采用链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱发慢性实验性糖尿病大鼠,在此基础上制作大鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)模型[2-5],但因所选糖尿病模型和脑缺血模型的不同,结果不尽一致。本实验在鼠糖尿病模型的基础上,应用线栓法制备大鼠MCAO模型,成功制备了糖尿病并脑梗死大鼠模型,现将实验操作方法及所得经验教训总结报道如下。1材料与方法1.1材料1.1.1动物分组健康5周龄雄性Spraque-Dawley(SD)大鼠40只,随机分为假手术对照组(Sham组)、单纯脑梗死组(MCAO组)、单纯糖尿病组(DM组)、糖尿病脑梗死组(DM+MCAO组),每组10只。假手术对照组及单纯脑梗死组给予普通饲料喂养,单纯糖尿病组和糖尿病脑梗死组给予高脂高糖饲料喂养,实验过程不合格及死亡大鼠在后续试验中予以补齐。1.1.2主要试剂与材料普通饲料和高脂高糖饲料(普通饲料中添加10%猪油、10%蛋黄粉和20%蔗糖)。饲料由泰山医学院实验动物中心提供,喂养前1周临时配制,压制成形后喂养。STZ由美国Sigma公司生产;2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC):北京索莱宝公司产品。1.2方法1.2.1糖尿病动物模型的制备参照文献[6]制作糖尿病大鼠模型,高脂高糖饲料喂养至4周后,所有动物称重并测量血糖,继之用腹腔注射STZ的方法建立糖尿病模型。STZ浓度为30mg/kg,注射前将STZ溶于pH为4.5的0.1mmol/L的柠檬酸缓冲液中。假手术对照组和单纯脑梗死组注射同等容积的柠檬酸缓冲液,不加入STZ。随后继续按照原来饲料喂养方式喂养1周,用血糖仪测定血糖,若血糖16.7mmol/L,则判定为糖尿病大鼠[6],动态观察大鼠症状和体征,淘汰血糖不达标大鼠。1.2.2脑梗死模型的制备参照经典的Longa不开颅经颈总动脉栓入尼龙线致大脑中动脉闭塞的方法[7],腹腔内注射水合氯醛(300mg/kg)麻醉,做颈部正中切口,自颈总动脉分叉处做一微切口,插入用浓盐酸硝酸预混液预处理过的3号鱼线(0.26mm直径),插入深度18mm20mm。假手术对照组和单纯糖尿病组同样进行手术,但线栓插入深度为10mm并且1min后拔出。1.2.3糖尿病脑梗死模型的建立高脂高糖饲料喂养4周,进行腹腔STZ注射,2周后测定血糖,筛选血糖合格糖尿病大鼠,进行线栓法制作脑梗死模型,进行观察评价,有神经功能缺损者为成功模型。1.2.4神经功能评分标准大鼠清醒后,大鼠全部进行行为学观察,进行神经功能评分,参照Bederson等[8]的评定方法进行神经功能评分:0分无症状;1分为提鼠尾时瘫痪侧前肢回收屈曲;2分为除1级体征外,大鼠向瘫痪侧推时感阻力较对侧明显降低;3分为除以上体征外,大鼠爬行时向瘫痪侧旋转;不能自发行走,意识丧失为4分。评分为1分3分则为造模成功。0分和4分者剔除。1.2.5脑梗死体积测定MCAO手术后6h,大鼠断头取脑,放入冰盐水中肉眼观察大脑中动脉(MCA)系统有无血栓形成及脑组织水肿情况,颅底有无出

参考文献

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