小鼠TIM2基因真核表达载体的构建及鉴定

作者:马玲娣;张彦;文世宏;何於娟;刘小珊;康格非;蒋纪恺 刊名:细胞与分子免疫学杂志 上传者:蒋亚芬

【摘要】目的:构建真核表达载体pIRES2-EGFP-TIM2,并在小鼠肝癌细胞系H22中进行表达。方法:用RT-PCR法扩增得到TIM2基因,构建重组真核表达载体pIRES2-EGFP-TIM2,并进行BamHI及BglⅡ双酶切鉴定和测序。通过脂质体法转染H22细胞,用RT-PCR法检测H22细胞中TIM2mRNA的表达。结果:构建了真核表达载体pIRES2-EGFP-TIM2,用脂质体法转染H22细胞后,用荧光显微镜观察和RT-PCR法检测,可见细胞内有EGFP及TIM2mRNA的表达。结论:成功地构建重组真核表达载体pIRES2-EGFP-TIM2,并在小鼠H22细胞中表达,为进一步研究TIM2在肿瘤生物治疗中的应用奠定了基础。

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·论著· 文章编号:!""# $%#&%(’""()"( $"#!& $"& 小鼠 !"#$ 基因真核表达载体的构建及鉴定 马玲娣!,张) 彦’,文世宏!,何於娟’,刘小珊&,康格非’,蒋纪恺&!(! 南京医科大学附属常州第二人民医院中心实 验室,江苏 常州 ’!&""&;’重庆医科大学检验系临床生化教研室,重庆 *"""!(;&汕头大学医学院分子生物学中心,广东 汕头 +!+"&! """""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""""" ) 收稿日期:’""( $"+ $!,; ) 接受日期:’""( $"( $"( 基金项目:国家自然科学基金资助项目(&"!#!!+")作者简介:马玲娣(!,#& $ ),女,新疆石河子人,讲师,博士 -./:"+!,0%!&’((&;10234/:/456742389:;!’(< =>2 !?>@@.9A>57456 3BC:>@,-./:"#+*0%,""’"& 10234/:DED4356; 9CB< .7B< =5 [摘 要] ) 目的:构建真核表达载体 AFG1H’01IJK0-FL’,并在小鼠肝癌细胞系 M’’ 中进行表达。方法:用 G-0K?G 法扩增得到 -FL’ 基因,构建重组真核表达载体 AFG1H’01IJK0 -FL’,并进行 !"#M F 及 !$% !双酶切鉴定和测序。通过脂 质体法转染 M’’ 细胞,用 G-0K?G 法检测 M’’ 细胞中 -FL’ 2GNO 的表达。结果:构建了真核表达载体 AFG1H’01IJK0 -FL’,用脂质体法转染 M’’ 细胞后,用荧光显微镜观察和 G-0K?G 法检测,可见细胞内有 1IJK 及 -FL’ 2GNO 的表达。结论:成功地构建重组真核表达载体 AFG1H’01IJK0-FL’,并在小鼠 M’’ 细胞中表达,为进一步研究 -FL’ 在肿瘤生物治疗中的应用奠定了基础。 [关键词] - 细胞免疫球蛋白和黏蛋白结构域分子 ’;增强型绿色荧光蛋白;真核表达载体;小鼠 M’’ 肝癌细胞 [中图分类号] G#&,< ’(*) ) ) [文献标识码] O ) ) -FL’ 是于 ’""’ 年首次报道的 ! 个小鼠新的基因家族成员,因其分子中含有保守的 F6 可变区和黏蛋白样结构,故将其命名为 - 细胞免疫球蛋白和黏蛋白结构域分子 ’(- =.// 422B5>6/>PB/45 7>2345 357 2B=45 7>2345 A@>C.45 ’,-FL’)。目前,-FL 家族共发现了 & 个成员,均表达于活化的 ?Q* R -: 细胞膜上,可促进 ?Q* R -: 细胞的活化、增殖、早期合成和分泌 -:! 及 -:’ 型细胞因子,参与 ?Q* R -: 细胞介导的多种免疫应答的调节。目前,对 -FL’ 的研究主要集中于自身免疫性疾病,对其在抗肿瘤免疫中的作用及可能的机制尚未见报道[! $*]。本研究旨在得到-FL’ 的全长 =QNO,建立 -FL’ 基因的真核表达载体,并转染小鼠肝癌细胞株 M’’ 稳定表达,为研究 -FL’ 在抗肿瘤免疫中的作用提供实验依据。 %& 材料和方法 %< %& 材料& 小鼠 M’’ 肝癌细胞引自重庆医科大学病理生理 教研室。&’ ()%* SL!",、QM+" 及质粒 AFG1H’01IJK 均由本室保存。各种内切酶、-* QNO 连接酶购自 -3T3G3 公司。质粒小抽提试剂盒和胶回收试剂盒为上海华舜公司产品。真核转染试剂 U4A>V.=C3245-L’""" 为 F5W4C@>

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