基因枪注射GM-CSF基因同时局部注射肿瘤提取物治疗肿瘤的初步观察

作者:高全立;林晨;张叔人;马文波;张书岭;查园园;梁萧;张友会 刊名:中华微生物学和免疫学杂志 上传者:戴路

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具有刺激树突状细胞分化成熟、诱导粒细胞和巨噬细胞系增殖分化以及调节免疫应答的作用。在已知的细胞因子中,是抗肿瘤免疫治疗中最重要的因子之一1。以为基础的肿瘤免疫治疗已进行了较深入和广泛的临床实验,并展现了较好的应用前景2。为了进一步探讨高效方便的肿瘤免疫治疗新方法,我们用基因枪将含小鼠基因的载体注射于小鼠局部皮肤,于注射部位接种小鼠肿瘤细胞的冻融上清,观察小鼠产生抵抗肿瘤细胞攻击的能力。材料与方法基因与载体:3质粒,携带有小鼠的真核表达质粒,由中国医学科学院肿瘤研究所免疫室构建。细胞系:3:57/6小鼠来源的红白血病淋巴瘤(2),上海医科大学秦惠莲教授惠赠。实验动物:57/6小鼠,体重1820,中国医学科学院肿瘤研究所动物室提供。质粒制备:质粒提取、纯化及鉴定等按常规。基因枪子弹制备:按公司基因枪操作说明书进行,使每发子弹含1.75。3肿瘤抗原制备:5107/对数生长期的3细胞,放入液氮中冻结后室温下融化,如此反复冻融5次,4,10000离心20,收集上清,0.22滤膜过滤后冻存。动物实验:68周龄雌性57/6小鼠,共分4组,、组各10只,、组各5只。组小鼠腹部皮肤刮毛后,基因枪注射一发含基因载体(1.75)的子弹,24后分别于基因枪注射部位皮内接种0.1相当于106个3肿瘤细胞的破碎上清液。肿瘤抗原注射后第10天,小鼠皮下接种106个3细胞,观察实验动物的出瘤时间、肿瘤生长大小及死亡情况。对照、、组见图1注解。长期存活小鼠按60计算平均存活时间。对肿瘤消退的小鼠,距第一次攻击60后再用5106个3肿瘤细胞攻击,观察小鼠对该肿瘤的抵抗力。统计学处理:采用检验。结果和讨论基因枪注射3,并于局部注射3肿瘤细胞破碎上清液,实验组抵抗3肿瘤细胞攻击的能力远强于二者单独应用的和组,以及不含基因枪注射3对照组。其主要表现为肿瘤生长受到抑制,小鼠生存期明显延长(图1)。平均生存期、、、组分别为35、16.5、14和12;以组为对照,与实验组相比较差异有显著性(<0.05)。实验组有2只小鼠长出肿瘤后又完全消退,再次用3肿瘤细胞攻击,继续观察30,2只小鼠均无肿瘤生长,表明它们已产生了特异性抗肿瘤免疫。图1小鼠皮下接种3细胞后的存活率.注射3后,用106个3肿瘤细胞的破碎上清免疫;.注射3后,用106个3肿瘤细胞的破碎上清免疫;.单纯注射3;.单纯注射生理盐水以上仅为以肿瘤裂解上清液结合基因枪注射基因一次免疫后抗肿瘤效果,已初步显示出其具有较好的抗肿瘤免疫作用。由于基因枪将基因注射于局部皮肤后,注射部位可维持一定量的达2周之久。这样可诱导并活化大量的抗原递呈细胞特别是树突状细胞。这些结果和3等的报道相似,他们将表达的33成纤维细胞和照射灭活的26细胞二者结合同时接种于同一部位,可以诱导有效的免疫保护力。肿瘤细胞的破碎上清作为肿瘤抗原,原料充足,制备简单。基因枪将基因直接射入局部皮肤细胞,其优点为方便、安全、高效,并且所用基因量少。本文为初步结果,应从不同途径接种,进一步研究基因枪注射GM-CSF基因同时局部注射肿瘤提取物治疗肿瘤的初步观察@高全立$河南省人民医院皮肤科中国医学科学院 @林晨$中国协和医科大学国家分子生物学重点实验室 @张叔人$中国协和医科大学肿瘤研究所免疫室 @马文波$中国协和医科大学肿瘤研究所免疫室 @张书岭$河南省人民医院皮肤科中国医学科学院 @查园园$中国协和医科大学国家分子生物学重点实验室 @梁萧$中国协和医科大学国家分子生物学重点实验室 @张友会$中国协和医科大学肿瘤研究所免疫室1LeongSP,EndersZohrP,ZhouYM,et

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