细胞周期抑制蛋白p16、p27异常表达与胃癌生物学行为的关系

作者:季加孚;焦春宇;王怡;苏向前;徐卫国;张霁;谢玉泉;吕有勇;徐光炜 刊名:中国肿瘤临床 上传者:王铁成

【摘要】目的:探索细胞周期抑制蛋白p16、p27异常表达与胃癌生物学行为的关系。方法:免疫组织化学方法(S-P法)检测胃癌组织中p16、p27的表达,结合临床病理资料和随访资料进行回顾性研究,并作出评价。结果:p16表达降低与胃癌分期增加、淋巴结转移及不良预后显著相关。p27表达降低与淋巴结转移、浆膜浸润、晚期胃癌、弥漫型胃癌及不良预后显著相关。结论:p16、p27异常表达与胃癌不良的生物学行为及预后有关,可作为预后指标,有利于个体化治疗及提高胃癌的疗效

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细胞周期是细胞生命活动的基本过程,其运行受控于精密的细胞周期调控机制。细胞周期抑制蛋白异常表达将导致细胞周期的失控,包括细胞周期启动、运行和终止的异常。使细胞获得以增殖过多、凋亡过少为主要形式的失控性生长特征。因此,肿瘤是一类细胞周期疾病。肿瘤对细胞周期的影响,一方面表现为对细胞周期监控机制的破坏,另一方面表现为对细胞周期驱动机制的破坏。大量研究表明p16是变异率极高的基因1,p27蛋白在多种肿瘤中均有异常表达,p16、p27蛋白是细胞周期监控、驱动机制中最主要的调控蛋白,对细胞周期具有显著的抑制作用2,检测这些蛋白有助于对胃癌生物学行为及预后的认识。1材料与方法11临床资料本实验选择1990年1月至1994年1月间在北京肿瘤研究所外科行根治术治疗,临床病理资料齐全,石蜡包埋标本保存完好并有长期随访资料的70例胃癌病例作为研究材料。全组中位随访时间为68个月(范围:292月)。12试剂鼠抗人p16多克隆抗体SC1661为美国SantaCruz公司产品,鼠抗人p27单克隆抗体、SPkit、DAB为美国Zymed公司产品。13染色方法采用SP法,4m连续石蜡切片6张,一张做HE染色,在001molL枸橼酸缓冲液中热修复p27抗原,9296,10分钟。p16、p27抗体的工作浓度分别为1:400、1:300、1:200稀释生物素化二抗和1:200稀释SABCstreptavidinbiotinperoxidiaecomplex三抗。镜下控制DAB显色25分钟,苏木素复染50秒。对照组:用已知乳腺癌、卵巢癌阳性切片作阳性对照,磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗作阴性对照。14染色判断由两位有经验的研究者,在不了解临床病理资料的情况下,分别做出判断;p16,p27均表达于细胞核(图1,2)。每张切片选择3个区在400倍视野下连续计数200个瘤细胞。按Fromowitz方法作如下评分:图1p16蛋白在胃癌肿瘤细胞核表达2001)无着色为0、淡黄色为1、棕黄色为2、棕褐色为3。2)阳性范围:5为0、525为1、2650为2、5175为3、75为4。3)两项结果相加2为阴性(),23为弱阳性(),45为中度阳性(),67为强阳性()。15统计学分析采用有序分组资料的Pearson2检验,分析p16、p27表达与6种主要病理参数的关系。各基因表达的不同程度对生存率的影响采用Logrank检验并做KaplanMeier生存曲线分析。图2p27蛋白在胃癌肿瘤细胞核表达2002结果2170例胃癌标本的p16,p27表达水平分布(表1)表1p16,p27表达水平例基因表达p1638111110457p2747341632822p16表达与主要病理因素的关系p16在正常组织中高表达(),在癌组织中表达(、、)为异常表达。p16表达降低与胃癌分期增加及淋巴结转移显著相关(各为P005,P0001)。见表2。23p27表达与主要病理因素的关系p27在正常组织中高表达(),在癌组织中表达(、、)为异常表达。p27表达在淋巴结转移、浆膜浸润、晚期胃癌及弥漫型胃癌组明显低于对照组(各为P0025,P0025,P0001,P005)。见表3。p27高表达组5年累计生存率为423,p27异常表达组5年累计生存率为216,两组患者生存率差异有显著性(P00267),见图3。p16高表达组5年累计生存率为502,p16异常表达组5年累计生存率为221,两组患者生存率差异有显著性(P00474),见图4。图470例胃癌患者p16表达不同分级的生存曲线P004743讨论p16蛋白为公认的细胞周期负调

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