培美曲塞脂质体的制备及其对乳腺癌的作用观察

作者:柏方;陈婷;刘艳;吴克瑾;陈青;陆云姝;葛梅馨; 刊名:上海交通大学学报(医学版) 上传者:韩奎亮

【摘要】目的 · 制备培美曲塞脂质体,观察其对乳腺癌细胞MCF-7及荷瘤裸鼠模型肿瘤的抑制作用.方法 · 采用薄膜分散法制作脂质体,CCK-8法检测其对MCF-7细胞的抑制作用;建立Balb/c裸鼠荷瘤模型,通过尾静脉给药以检测其抑瘤作用.结果 · 培美曲塞脂质体可抑制MCF-7细胞增殖,当培美曲塞浓度分别为0.20、0.40和10.00μg/mL时,实验组(培美曲塞脂质体)的细胞生存率显著小于对照组(等浓度梯度培美曲塞),P值分别为0.013、0.035和0.041.与空白组(等剂量PBS)比较,实验组(培美曲塞脂质体)和对照组(等剂量培美曲塞)Balb/c裸鼠肿瘤的体积和质量均显著减小;实验组肿瘤的体积和质量也均显著小于对照组(均P=0.000).结论 · 相对于培美曲塞原料药物,脂质体能抑制MCF-7细胞的增殖,通过尾静脉给药能有效抑制肿瘤在Balb/c裸鼠体内的生长.

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乳腺癌是目前女性发病率最高的癌症[1]。化学治疗(化疗)是乳腺癌的主要治疗方式之一,临床一线常用的化疗药物为蒽环类和紫杉类,但30%的患者会出现复发和转移[2-3]。培美曲塞是一种结构上含有核心为吡咯嘧啶基团的抗叶酸制剂,可以通过破坏细胞内叶酸依赖性的正常代谢过程,抑制细胞复制及肿瘤的生长[4]。脂质体是双层磷脂分子定向排列形成的直径<200nm的超微粒子,作为一种有效的药物载体,具有组织相容性、细胞亲和性、靶向性、缓解性等性质,从而提高药物的疗效和安全性[5]。我们拟制备包裹培美曲塞的脂质体,探讨培美曲塞脂质体对乳腺肿瘤的抑制作用,以期为其治疗提供新思路和新靶点。1材料与方法1.1动物、试剂和仪器5周雌性Balb/c裸鼠由上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供,动物生产许可证号为SCXK(沪)2013-0016,动物使用许可证号为SYXK(沪)2013-0106。培培美曲塞脂质体的制备及其对乳腺癌的作用观察柏方1,陈婷2,刘艳2,吴克瑾3,陈青1,陆云姝1,葛梅馨11.上海交通大学医学院附属新华医院普外科,上海200092;2.上海交通大学医学院附属新华医院药剂科,上海200092;3.复旦大学附属妇产科医院乳腺外科,上海200011美曲塞(南京先声东元制药有限公司);MCF-7细胞(中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心);RPMI1640培养基(Hyclone公司);透射电子显微镜H-600(日本HITACHI公司);高效液相色谱仪L-2000系列(日本HITACHI公司)。1.2实验方法1.2.1脂质体制作及特性测定采用薄膜分散法制作脂质体,采用高效液相色谱法(highperformanceliquidchromatography,HPLC)测定包封率和载药量,按照文献中的方法[6]以及预实验结果确定色谱条件。流动相为0.02mol/L磷酸氢二钠-乙腈(85:15);检测波长226nm。将适量脂质体悬液滴到已载有碳膜的铜网上,1.0%磷钨酸染色,干燥后即得透射电子显微镜样品。1.2.2细胞毒性试验采用CCK-8方法进行细胞毒性试验。将MCF-7单细胞悬液接种于96孔培养板中,每孔3000个细胞,24h后加入不同浓度的培美曲塞脂质体至终浓度分别为10.00、0.40、0.20、0.08和0g/mL,设为实验组;对照组加入等浓度梯度的培美曲塞(每组设置6个复孔,实验重复3次)。培养96h后,加入10%的CCK-8,另在无细胞空白孔处加入培养基,作为本底,培养4h。在450nm波长下检测吸光度D(450nm),计算细胞生存率。1.2.3肿瘤模型的建立和肿瘤抑制试验在每只裸鼠左侧乳房脂肪垫上接种1107个MCF-7细胞的磷酸盐缓冲液(PBS)配制的悬液。当裸鼠肿瘤体积>150mm3时,随机分为3组,每组6只。实验组每只予20mg/kg培美曲塞脂质体,尾静脉给药,每日1次,连续12d;对照组注射同等剂量培美曲塞;空白组注射同等剂量PBS。颈椎脱臼法处死裸鼠,称量肿瘤质量,使用游标卡尺测量肿瘤体积。1.3统计学方法采用SPSS17.0软件进行统计学分析,数据均以xs表示,采用独立样本t检验进行组间比较,P<0.05表示差异具有统计学意义。2结果2.1脂质体特性经检测,本品载药量0.5mg/mL,包封率62.5%,脂质体大小及形态见图1。透射电子显微镜下观察见脂质体粒的粒径较为均一。2.2MCF-7细胞生存率实验组及对照组药物对MCF-7细胞均有显著的抑制作用。随着药物浓度升高,MCF-7细胞生存率逐渐下降。当培美曲塞浓度分别为0.2、0.4和10g/

参考文献

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