高脂饮食诱导妊娠期糖尿病大鼠模型的建立

作者:张馨文;张燕;胡晏馨;潘宝龙;王名芳;马润玫; 刊名:昆明医科大学学报 上传者:刘宏涛

【摘要】目的 通过高脂饮食喂养的方法建立妊娠期糖尿病大鼠模型.方法 选取雌性SD大鼠55只,随机分为正常饮食未孕组、正常饮食怀孕组、高脂饮食未孕组、高脂饮食怀孕组,喂养3月后孕鼠组与雄性大鼠2∶1合笼,各组继续给予高脂或普通饲料,分别于孕前及妊娠1、7、14、20 d测空腹血糖与体重,用酶联免疫吸附法动态监测空腹胰岛素和血清C肽值并计算胰岛素抵抗指数,于妊娠末期评估大鼠的葡萄糖耐量和血脂代谢指标,取大鼠肝脏和胰腺组织切片染色并做镜下观察.结果 高脂大鼠体重明显高于对照鼠,孕期体重显著增加(P<0.05),在孕期高脂孕鼠的空腹血糖,胰岛素,C肽水平都显著高于正常怀孕大鼠,胰岛素抵抗明显(P<0.05),孕晚期高脂怀孕大鼠的葡萄糖耐量曲线下面积、血脂水平都明显升高(P<0.05).结论 使用高脂饮食诱导可成功建立妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus,GDM)的大鼠模型,此模型接近人类妊娠糖尿病的发病特点,为今后的广泛研究提供了媒介.

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妊娠糖尿病(gestationaldiabetesmellitus,GDM)是指妊娠期出现或首次被识别出的不同程度的葡萄糖耐量受损,是妊娠期常见的并发症之一[1].随着生活方式的改善,全球平均每年有10%的妊娠妇女患有妊娠期糖尿病,并且发病率还在进一步上升[2].妊娠期糖尿病严重危害孕妇、胎儿及新生儿的身心健康[3],如今,GDM的防治工作已经成为了产科和内分泌科的一个重要课题.本实验利用高脂饲料喂养SD大鼠诱导胰岛素抵抗复制类似于人类GDM的发病过程的大鼠模型,为GDM的进一步研究提供可靠的研究媒介.1材料与方法1.1实验动物选用健康清洁级6周龄SD大鼠雌性55只,雄性20只,体重160~180(购于湖南斯莱克景达实验动物有限公司,SYXK(滇)2011-0006,大鼠自由摄食进水,昼夜交替自然光照.1.2主要试剂血糖仪和试纸(强生公司),大鼠游离脂肪酸ELISA试剂盒(上海江莱生物科技有限公司),大鼠胰岛素超敏ELISA试剂盒、大鼠C肽ELISA试剂盒(美国ALPCO公司).1.3造模方法将选取的55只健康雌性SD大鼠用普通饲料适应性喂养2周,按照随机数字表将大鼠分为以下4组:(1)正常饮食非孕鼠组(NV)10只,正常雌性未孕大鼠,采用国家标准啮齿类动物饲料配方喂养;(2)正常饮食孕鼠组(NP)15只,大鼠妊娠前后均采用国家标准啮齿类动物饲料配方喂养;(3)高脂饮食非孕鼠组(FV)10只,正常雌性未孕大鼠,采用高脂饲料喂养;(4)高脂饮食孕鼠组(FP)20只,大鼠妊娠前后均采用高脂饲料喂养.高脂饲料含有60%的脂肪热能,购买于美国的ResearchDiets公司,普通饲料采用国家标准啮齿类动物饲料配方,购置于昆明医科大学实验动物中心.所有大鼠不限食物和水,喂养3个月后,孕鼠组与SD雄性大鼠按2:1的比例合笼配对,第2天早晨发现阴道栓或者阴道生理盐水冲洗回抽镜检发现精子为怀孕第1天.间断称体重,在适应2周、高脂1月、2月、合笼前及孕1、7、14、20d从大鼠尾静脉采血动态检测空腹血糖、空腹胰岛素及空腹C肽(c-peptide)水平变化,运用稳态模型(HOMA)计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),计算公式为:HOMA-IR=FBGFINS/22.5,判断胰岛素抵抗程度.妊娠第20天时行葡萄糖耐量试验(glucosetolerancetest,GTT)大鼠空腹12h,用无水葡萄糖粉溶于生理盐水配成20%浓度的葡萄糖溶液,根据2g/kg腹腔注射,于0、30、60、120min后尾静脉采血,用强生血糖仪检测测血糖水平,计算血糖曲线下面积.GTT试验后,4组大鼠用10%水合氯醛按0.3mL/100g体重计算,腹腔注射麻醉,股动脉取血,静置半小时后3000r/min离心5min分离取血清,送昆明医科大学实验动物中心运用全自动生化分析仪AU480检测大鼠总胆汁酸、总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白和低密度脂蛋白,用ELISA试剂盒检测大鼠游离脂肪酸.处死大鼠取肝脏和胰腺,染色后镜下观察组织病理变化.1.4统计学处理数据采用SPSS软件进行统计分析.两组间比较用t检验,所有数据以均数标准差(xs)表示,2组间的比较采用t检验,多组间比较用方差分析,多组间两两比较用SNK检验.2结果2.1体重变化给予高脂饲料前,高脂大鼠组与对照组大鼠的体重水平无明显差异(P>0.05),高脂饮食喂养1个月后,高脂大鼠体重明显高于普食组(P<0.05),该趋势持续到合笼前.妊娠后体重进一步增长,整个孕期高脂怀孕大鼠体重都明显重于普通怀孕大鼠,差异具有统计学意义(P<0.05),见

参考文献

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