GPR119对脂质代谢相关基因表达的影响

作者:陈志平;王岚枫;胡蓉; 刊名:中国当代医药 上传者:曹玲

【摘要】目的 分析THP-1巨噬细胞中过表达GPR119对脂质代谢相关基因表达的影响.方法 构建过表达GPR119载体,转染THP-1细胞,用佛波酯(160 nmol/L,48 h)分化成巨噬细胞.NC组:空载体转染THP-1+Dil-oxLDL(50 μg/ml)48 h;GPR119(H)组:过表达GPR119转染THP-1+Dil-oxLDL(50 μg/ml)48 h.检测过表达GPR119转染THP-1巨噬细胞后脂质代谢相关基因表达.结果 过表达GPR119组SR-B1、APOE、LCAT基因表达显著高于NC组表达(P=0.000).结论 过表达GPR119能引起脂质代谢相关基因表达变化.

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GPR119是一个新的可能参与调节体内脂质代谢的膜受体[1-2]。GPR119属于G蛋白偶联受体A家族,有7个跨膜区,在胞浆内与三个亚单位(、、)所组成的G蛋白偶联,主要表达在胰岛和胃肠道细胞[3-4]。人源性GPR119的基因定位于Xq26.1,该基因的开放阅读框架仅有一个外显子,不含内含子,编码335个氨基酸。GPR119在治疗2型糖尿病及肥胖的作用有比较深入的研究,并提示GPR119可能参与脂质代谢[5-8]。本文旨在探讨GPR119是否参与脂质代谢,研究过表达GPR119后脂质代谢相关基因的表达。1资料与方法1.1细胞培养THP-1细胞从AmericanTypeCultureCollection(ATCC,Manassas,VA,USA)获得,用RPMI-1640培养基培养,RPMI-1640培养基包含10%胎牛血清和1%青霉素/链霉素,培养环境为37C,5%CO2。细胞被种植于6孔板或12孔板或60mm平皿,并且生长到铺满平皿达80%~90%时待用。NC组:空载体转染THP-1+Dil-oxLDL(50g/ml)48h;GPR119(H)组:过表达GPR119转染THP-1+Dil-oxLDL(50g/ml)48h。1.2主要仪器与试剂CO2培养箱(美国Thermo公司);超净工作台(美国Thermo公司);7500Fast荧光定量仪(美国ABI公司);胎牛血清(四季青公司);Lipofectamine2000(美国Invitrogen公司);PrimeScriptRRTEnzymeMixI和SYBRRPremixExTaqTMII等基因检测试剂(购自Takara公司)。1.3转染Lipofectamine2000过表达GPR119,转染THP-1细胞(按美国Invitrogen公司说明书操作),用佛波酯(160nmol/L,48h)分化成巨噬细胞。1.4基因检测THP-1巨噬细胞PBS清洗3遍,提取总RNA,并将mRNA反转录成cDNA。反应条件为:37下15min,85下5s(表1)。表1试剂种类及用量按试剂说明书操作ABI7500FastReal-TimeRCRSystem,反应条件为:95下预变性30s,95下5s,60下34s,40次循环后分离(表2)。表2试剂种类及用量所有标本均于同一反应体系中进行,每份重复检测3次。1.5检测指标检测过表达GPR119转染THP-1巨噬细胞后脂质代谢相关基因清道夫B1(SR-B1)、载脂蛋白E(APOE)及卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)表达。1.6统计学分析采用SPSS13.0统计学软件对数据进行处理,计量资料采用均数标准差(xs)表示,采用t检验,以P<0.05为差异有统计学意义。2结果采用实时定量PCR测定过表达GPR119后THP-1巨噬细胞中SR-B1、APOE及LCAT表达,结果表明,与NC组比较,GPR119(H)组SR-B1、APOE及LCAT表达显著升高(P<0.01)(表3)。表3过表达GPR119后SR-B1、APOE及LCAT表达变化(xs,n=3)3讨论本研究表明,过表达GPR119后THP-1巨噬细胞中SR-B1、APOE、LCAT表达显著上调(P=0.000)。SR-B1是一个多配体受体,能在高密度脂蛋白(HDL)与细胞间介导双向脂质转运,可以在动脉粥样硬化斑块的巨噬细胞中表达,对肝脏胆固醇的逆向转运和抗动脉粥样硬化都是必须的。SR-B1敲除鼠可导致快速的冠状动脉闭塞、心肌梗死、心功能降低和死亡,提示SR-B1对于脂质调节和抗动脉粥样硬化起重要作用[9]。A

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