高效液相色谱-质谱法测定水中氯霉素效果分析

作者:郭晓关;李俊; 刊名:耕作与栽培 上传者:常兰

【摘要】为建立水氯霉素残留检测方法,分析了高效液相色谱-质谱法测定水中氯霉素残留效果.结果表明高效液相色谱-质谱法测定水中氯霉素残留实验添加平均回收率为86.1% ~92.1%,相对标准偏差(RSD,n=6)为3.41% ~4.57%;相关系数为0.9982;方法检出限为6×10-3μg·L-1,定量限为2×10-2μg·L-1,说明具有快速、准确、灵敏度高等特点,适用于水中氯霉素残留检测检测分析.

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氯霉素(chloramphenicol,简称CAP),由大卫戈特利布(DavidGottlieb)于1947年从南美洲委内瑞拉的土壤内的委内瑞拉链霉菌(Streptomycesvenezuelae)成功分离,再于1949年合成并引入临床试验。它属抑菌性广谱抗生素,是世界上首种完全由合成方法大量制造的广谱抗生素,对很多不同种类的微生物均起著作用[1]。但是氯霉素有严重的副作用,它能抑制人体骨髓造血功能而引起再生障碍性贫血和粒状白细胞缺乏等疾病。因此,国内外都有相关法规,,来限定食品中氯霉素的最高残留量[2]。由于价格低廉,早期曾被广泛用于人、畜多种传染性疾病的治疗,我国上世纪80年代开始在水产养殖业中得到广泛的应用,氯霉素的使用会照成在水产品中和水体中的残留,通过食物链最后对人类造成危害。目前,针对水产品[3,4]、禽类[5,6]、蜂蜜[7,8]、牛奶[9,10]等对象的研究居多。水是生命之源,水之源有机污染物调查是环境保护的需要,因此急需建立一种经济、快速、灵敏、准确的水中氯霉素分析方法,提高分析效率,尽可能获取信息。氯霉素残留常规分析方法主要有微生物方法、高效液相色谱-质谱联用法和气相色谱-质谱联用法,微生物方法操作繁杂费时,只能做定性检测分析;高效液相色谱-质谱联用仪和气相色谱-质谱联用仪是目前最常用的定量方法。为此,建立了高效液相色谱-质谱法测定水中CAP残留量的方法,并进行了效果分析。1材料与方法1.1材料、试剂与仪器试验使用样品水取于贵阳市花溪水库;水体如浑浊需取回需过滤后在试验使用。高效液相色谱-质谱仪(4000QtrapLC-/MS/MS,美国ABI公司);氮吹仪(美国OI)。乙腈、乙酸乙酯、二氯甲烷、甲醇、正己烷(色谱纯,美国天地公司),超纯水(实验室自制);C18固相萃取柱(1000mg/6mL,美国Waters公司);氯霉素标准品(美国sigma公司);1.2样品前处理C18固相萃取小柱依次用5mL二氯甲烷、甲醇、水活化平衡,将500mL水样以5mL/min的速度连续上样到C18柱,氮气吹干,完成样品在C18柱上的富集,不收集上述所有滤液,最后用3mL乙酸乙酯洗脱柱子,收集滤液,在40水浴氮吹至尽干,甲醇定溶至5mL,LC-/MS/MS联用仪测定。1.3仪器条件色谱条件色谱柱:KinebeC18色谱柱(100mm2.10mm,2.6m);流动相:甲醇/水(6/4,V/V);流速0.5mL/min;进样量2.0L;柱温(35)。质谱条件电喷雾正离子化源(ESI+);毛细管电压(3.5kv);离子源温度(100);雾化温度(300);脱溶剂气(500L/h);多反应检测模式(MRM)扫描;定性离子对(320.9>257.0),去簇电压(-55)碰撞能量(-16);定量离子对(320.9>152.0),去簇电压(-55),碰撞能量(-26);MRM色谱图见图1。图1氯霉素SRM色谱图Fig.1SRMChromatogramofthechloramphenicol2结果与讨论2.1水样提取与净化采用C18反向固相萃取柱富集洗脱净化样品。洗脱液的极性强弱决定了样品的净化效果,目的是要使用最小量的洗脱液将氯霉素洗脱出来,而且还要防止杂质的大量流出。实验分别采用正己烷、乙酸乙酯、二氯甲烷、乙腈作为洗脱液净化已添加氯霉素的样品,考虑样品添加回收率及净化效果。在500mL水样中添加5g氯霉素,分别用10mL正己烷、乙酸乙酯、二氯甲烷洗脱C18反向固相萃取柱,收集液每1mL收集一次,用甲醇溶剂置换后定容为1mL上机检测,重复做3次,利用平均峰面积

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