鲫鱼尾部神经分泌系统组织化学和凝胶电泳的初步研究

作者:徐根兴;朱洪文;刘荣臻 刊名:南京大学学报(自然科学版) 上传者:钟伟

【摘要】本文用凝胶电泳和一些组织化学方法对鲫鱼尾部神经分泌系统的分泌物进行了研究。尾部神经分泌细胞的分泌物是蛋白质性质的,细胞体和核仁中含丰富的RNA,细胞质显示强酸性磷酸酶阳性反应,对碱性磷酸酶也呈阳性反应,但对PAS反应则为阴性反应。以15.3%浓度的凝胶电泳分离脊髓前部、尾都和尾垂体的水性抽提液,分别得到9—12、8—9和13—15条带,它们的电泳图谱显示出差异。在尾垂体的电泳图谱中有两条独特的带,可能是尾垂体中的两种特异蛋白。这些结果进一步证明了我们在形态学上观察到的鲫鱼尾垂体附近的脊髓和脊髓其他部分之间的差异。

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前.JLd目尾部神经分泌系统是鱼类所特有的神经内分泌结构。在硬骨鱼中,该系统由脊髓尾部的神经分泌细胞的细胞体和它们的轴突以及尾垂体中的神经血管复合体三部分所组成。Holmgren等[’]曾报道过,尾部神经分泌细胞的分泌物是蛋白质性质的,不含糖类,但含少量脂类。Bern和Lederis21认为,尾部神经分泌系统中至少有四种活性肤,总称为尾垂体紧张素(Urotensinsl,JI,班,W),以后又有一些学者认为,尾部神经分泌系统中存在两个或多个独特的尾垂体激素载体蛋自(Urophysins)【3’呼!。我们用光镜和电镜也观察第3期徐报兴等:卿鱼尾部神经分泌系统组织化学和凝胶电泳的初步研究到,螂鱼脊髓尾部有许多大的神经分泌细胞。此外,在尾垂体中还观察到几种神经分泌题粒t51。Nishioka等[‘]认为,尾垂体活性肤和尾垂体激素载体蛋白可能存在于神经分泌顺粒中。本文是在研究螂鱼尾部神经分泌系统形态学的基础上,试图用组织化学和聚丙烯阶胺凝胶圆盘电泳的方法来研究螂鱼脊髓中一些物质的分布和神经分泌物的性质,目的在于了解尾部神经分泌系统的功能。二、材料和方法铆鱼(Cara::‘。:a“ratu:L.)2982和1983年6一6月份从市场购得,都是1一2龄1.采用的组织化学方法如下:(1)汞一澳酚兰法(Ma:ia,1953),勘定蛋白质。用earony液固定,常规石蜡切片。(2)甲基绿一派洛宁法(Braehet,1942),勘定RNA。(3)硝酸铅法(Gomori,1050),勘定酸性磷酸酶(ACP)。(4)钙一钻法(Gomori,1952;ButeherandChayen,1066)勘定碱性磷酸酶(AKP)。(2)一(4)的方法均用丙酮(4)固定,常规石蜡切片或10%福尔马林(4、PH7)固定,冰冻切片。(5)过碘酸一Sehiff法(Hotehkiss,1945)(PAS法)勘定糖类。Carony液固定,常规石蜡切片。(6)苏丹黑B法(Memanus,1946)染脂类。10%福尔马林(4、PH7)固定,冰冻切尔。上述各种方法同时都做了对照实验。2.凝胶电泳方法:(1)样品制备螂鱼活时解剖,取尾垂体、脊髓尾部(相当于尾部最后10节脊推骨部分的脊髓)和脊髓前部(脊髓尾部前的其余脊髓部分)三部分,分别用鲤鱼Ringe:液I‘]洗涤,用玻璃匀浆器制成匀浆,用蒸馏水抽提。抽提液以3500转/分的速度离心15分钟,去沉淀,再在IGL一16型高速台式离心机上(8000转/分)离心10分钟,取上清液,配成含10%蔗糖的样品液,用前贮于4冰箱中。(2)电泳方法聚丙烯酞胺凝胶圆盘电泳采用Dayis[.1的方’法略加改进,即C液(小孔胶单体溶液)的配方改为:丙烯酞胺60克,甲叉双丙烯酞胺1.2克,加重蒸水至100毫升。F液改为,140毫克过硫酸按用重蒸水配成10。毫升溶液。A液不变。A:C:HZO:F液为1:才2:3。在浓缩胶中则用40%蔗糖溶液代替尿素液(G液),其余不变。以Tris一g行缓冲液作为电极缓冲液(PHS.3)。用澳酚兰作指示剂。用5.5x10厘米玻璃管,小孔分离胶高8厘米,再加1厘米浓缩胶,电泳在室温进行,开始时的电流为1毫安/管,待样品进入分离胶时把电流调至2.5毫安/管,电泳2.5小时,取出凝胶用0.5%氨墓黑IOB染色1.5小时,再以7%醋酸脱色,直至凝胶透明为止,置于7%醋酸中保存。一部分脱色后的凝胶用CS一910双波长薄层色谱扫描仪(日本岛津)扫描,样品波长(孟:)为603n。,参考波长(久:)为750nm,狭缝为10x0.063毫米。用C一EIB色谱数南

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