丁苯酞预处理对大鼠局灶脑缺血再灌注NF-κB表达的影响

作者:王鹏;王凯丽;刘华坤;程文静;李玉芝; 刊名:临床医药文献电子杂志 上传者:商庆炳

【摘要】目的探讨丁苯酞预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注NF-кB的表达。方法把60只成年的健康SD大鼠随机分成三组,分别是假手术(sham)组、缺血再灌注(I/R)组和丁苯酞预处理(NBP)组。采用线栓法制作大脑中动脉栓塞模型,缺血2 h后,行再灌注24 h后观察大鼠的神经行为学评分、脑梗死体积、脑组织NF-кB蛋白及m RNA表达情况。结果与缺血再灌注组相比,丁苯酞预处理组神经行为学评分显著高于缺血再灌注组,脑梗死体积较缺血再灌注组降低(P<0.05);丁苯酞预处理组脑组织NF-кB蛋白及m RNA表达明显降低(P<0.05)。结论丁苯酞对大鼠缺血再灌注损伤的脑保护作用,可能与抑制NF-кB的表达有关。

全文阅读

随着老龄化加剧,脑梗死已成为致死和致残的主要原因,尽快恢复供血是目前公认治疗脑梗死最有效方法,然而随之发生的再灌注损伤是目前急需解决的问题。丁苯酞作为我国拥有知识产权的一类药物,因在脑梗死治疗过程中能改善脑微循环、抑制血小板激活及降低梗死面积等多种药理作用,现已广泛应用到临床,但确切的分子机制仍不清楚。研究表明,NF-B信号通路介导的炎症反应在缺血再灌注损伤中起了重要作用[1]。论文主要是通过检测大鼠缺血侧半球NF-B蛋白和mRNA表达,讨论丁苯酞预处理对于NF-B信号转导通路的表达有着极大的影响,这是导致脑梗死产生的极为重要的原因。1资料与方法1.1一般资料实验的动物是60只SPF级SD大鼠,其体重在220~240g,级别为清洁级,济南市药物检验所实验动物中心所提供,将大鼠随机分成3组,每组20只:丁苯酞预处理(NBP)组、缺血再灌注(I/R)组以及假手术(Sham)组。实验药物为丁苯酞,从石药集团恩必普药业有限公司所购买。1.2模型制备NBP组按400mg/kg/d腹腔给药,I/R组和Sham组给予体积生理盐水腹腔注射,共1周。NBP组、I/R组参照Zea-Longa等[2]的线栓法制备左侧大脑中动脉阻塞模型,缺血2h,将线栓退至颈外动脉残端恢复再灌注24h后作相应处理。不符合模型要求的剔除,并及时补遗。sham组仅暴露颈总动脉及分叉处。实验当中的大鼠肛温的体温全部使用白炽灯来保持,手术之后都是分开单个笼子喂养的。1.3神经功能的评分方法再灌注24h根据Zea-Longa[3]等级进行,一共有4个等级:神经缺损的症状不明显的为0分;对侧的前肢无法伸展的为1分;行走的时候能够实现对侧旋转计入2分,在行走过程能够实现对侧倾倒的计分值为3分,如果还会在治疗后仍然没有办法实现独立行走或者不具备意识的计分值为4分。1.4对脑梗死体积进行测定方法每一组都随机抽取6只大鼠于再灌注24h麻醉以后再将大鼠断头并取脑,从额极2mm向后连续等距离的位置取出5个冠状脑片,其间距为2mm,2%TTC37避光染色10min。若颜色为红色则为正常脑组织,如果是白色则为梗死组织。梗死体积的计算方法为各层梗死面积之和和层间隔之间的乘积,层间隔一般情况下控制在2mm左右即可。1.5石蜡切片制备的方法取14只大鼠麻醉并进行仰卧和固定,然后使用250mm的生理盐水及4%的甲醛溶液从心脏进行灌注处理,在灌注完成之后要对其进行固定。在断头时一定要注重所取脑的完整性,在固定过程中所使用的溶液为4%的甲醛溶液,在利用甲醛溶液对其浸泡2h再利用蒸馏水对其进行浸泡,浸泡时间要控制在6h之内即可。冠状位切片后4保存,免疫组化和原位杂交备用。1.6免疫组化的方法在NF-B蛋白石蜡切片获得后要对其进行脱蜡处理,在脱蜡处理完成后要对其进行染色处理,染色过程中所使用的依据为SABC免疫组织化学试剂盒上的说明,一般情况下DAB会以显色状态所存在。在染色完成之后要利用光镜对样本细胞或者细胞核进行观察,如果观察过程中观察胞或者胞核以棕黄色颗粒所存在,那么则可以判定其为阳性细胞,在对样本进行观察的过程中要注重光强度的统一性,在研究过程中的放大倍数也要尽可能的保持一致。在对切片进行观察的过程中要先在低倍镜对额顶叶梗死灶周围的视野进行观察,然后在使用高倍镜对缺血灶周围阳性细胞进行计数,最终所确定的计数应该为不同视野中细胞的平均值。1.7原位杂交检测对NF-BmRNA使用石蜡切片进行常规的脱蜡处理,在脱蜡处理的过程中要对切片中所存在的内源性酶进行灭活,灭活完成之后在对其进行3%新鲜柠檬酸的滴入,这对于胃蛋白酶暴露mR

参考文献

引证文献

问答

我要提问