丝光绿蝇抗菌物质诱导初步研究

作者:陈正跃;许兵红;艾予川;任红斌;张海珠;刘世国;冯元春;史明珠 刊名:新乡医学院学报 上传者:王文鹏

【摘要】目的丝光绿蝇抗菌物质的诱导初步研究。方法丝光绿蝇三龄幼虫,采用超声波处理后24h提取其血淋巴,采用大肠杆菌作指示菌,作抑菌试验,以抑菌圈直径表示活力大小。结果丝光绿蝇三龄幼虫每160只约提取血淋巴0.5ml,超声波诱导后24h取血淋巴,对大肠杆菌有抑菌活力。结论超声波诱导丝光绿蝇后,其体内产生了抗菌物质。

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世界上现已记载的昆虫种类已超过万种,估计昆虫的个体数量为,昆虫的种类及个体数量如此之多引起了人们对其防御机制的关注,早期对昆虫免疫的研究见的综述,现在已知昆虫的免疫与高等动物相比有其特殊的免疫系统和免疫机制,许多昆虫在受到外界物质诱导时,能迅速产生一些体液免疫因子,如凝集素(),溶菌酶(),抗菌蛋白()及抗菌肽()等,这些物质主要是抗菌肽对细菌、某些真菌、病毒、原虫有特殊杀伤或抑制作用,引起了人们对其在医药及农业应用上的关注。目前采用多种理化因子处理,被诱导产生抗菌物质的昆虫已有几十种,研究工作主要集中在鳞翅目昆虫如:惜古比天蚕()、家蚕()、榨蚕();双翅目昆虫:如棕尾别麻蝇()、伏蝇()、果蝇()以河南省自然科学基础研究项目(课题号)作者单位河南新乡新乡医学院及鞘翅目、膜翅目等全变态昆虫,不全变态昆虫诱导产生抗菌物质的报道很少,仅见于红蝽()、蜻蜓()、美洲蜚蠊()。本文首次报道以丝光绿蝇为材料,诱导产生了抗菌物质。材料与方法昆虫与饲养供试验用的丝光绿蝇全部为三龄幼虫,由本实验室室内饲养繁殖。幼虫生长条件为温度、相对湿度,光照采用白炽灯,饲料主要由麸皮、牛奶粉、酵母粉和水配制而成。应试菌种为大肠杆菌,由本实验室提供,使用前将甘油冻存菌种复苏,接种到固体培养基上,恒温培养备用。超生波诱导超声波发生器为宁波型超声波细胞粉碎机。丝光绿蝇三龄幼虫用生理盐水反复冲洗,置于生理盐水中停食后,放入有预冷生理盐水的烧杯中,杯外加冰浴,超声波处理,、,处理后,只供给生理盐水,置于室内第取血淋巴,为实验组。另外,以未用超声波结合冰浴处理的丝光绿蝇幼虫的血淋巴为对照组。血淋巴收集取只丝光绿蝇幼虫用预冷生理盐水反复冲洗,再用无菌滤纸吸干虫体表面水分,加预冷生理盐水冰浴研磨,,离心,上清液置于冰箱保存。上清液减去生理盐水量即为血淋巴量。抑菌活力测定抑菌活力测定采用平板法,固体培养基配制如下:蛋白胨、牛肉膏、、琼脂,加去离子水至,调,首先将大肠杆菌用生理盐水制成悬液,取悬液与已经灭菌的培养基(高压蒸气灭菌)水浴快速混匀,取于培养皿制成平板,冰箱放置,每平板间隔一定距离打直径小孔,分别取实验组与对照组各血淋巴加入小孔内,恒温,察看抑菌圈,以抑菌圈直径()表示抑菌活力大小。结果丝光绿蝇血淋巴的提取量丝光绿蝇幼虫经研磨离心减去生理盐水量,试验得出只幼虫可得到血淋巴。经超声波诱导后,丝光绿蝇抗菌物质的基因启动并表达,后取血淋巴具有抑菌活力,说明体内已产生抗菌物质,抑菌活力见附表。附表丝光绿蝇血淋巴对大肠杆菌抑菌活力序号抑菌直径()实验组对照组平均值讨论由于丝光绿蝇幼虫个体较小,诱导处理较为困难,作者曾以昆虫针针刺体壁处理,结果绝大部分个体不久死亡,可能由于感染病菌所致。本次试验利用超声波结合冰浴处理,丝光绿蝇幼虫个体存活良好,并诱导产生了抗菌物质,分离、鉴定工作正在进行之中。昆虫经诱导后产生的抗菌物质,其中主要成份是抗菌肽,是一类小分子肽类,其基因在正常情况下不表达,受到诱导后才转录、翻译产生抗菌肽,抗菌肽具有广谱的抗菌活性及一些特殊的生物活性,在医药、农业、食品防腐上有广阔的应用前景,由于该领域的研究起步较晚,目前在农业上利用昆虫抗菌基因培育抗病新品种以及转基因工程产生抗菌物质用于临床及食品防腐工作还处于研究阶段,但这一领域的应用前景已引起了越来越多的关注。(致谢日本东京大学教授、瑞典斯特哥尔摩教授赠送部分资料,河南师范大学生物系牛瑶同志帮助复印部分文献,作者在此一并致谢。丝光绿蝇抗菌物质诱导初步研究@陈正跃@许兵红@艾予川@任红斌@张海珠@刘世国@冯元春@史明珠$新乡医学院

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