高效液相色谱法测定尿液中儿茶酚胺类物质

资源类型:pdf 资源大小:270.00KB 文档分类:医药、卫生 上传者:揣峻峰

相关文档

批量下载下列文档

文档信息

【作者】 乔坤云  高继玲 

【关键词】儿茶酚胺 尿液 高效液相色谱法 

【出版日期】2005-04-30

【摘要】本文报道用高效液相色谱法(HPLC)分离,荧光检测器检测儿茶酚胺含量的新方法。该法可同时分离测定去甲肾上腺素(NE)、肾上腺素(E)和多巴胺(DA)三种组分,三种组分的浓度与其峰面积均呈良好的线性关系。方法灵敏度高,选择性好,测定结果令人满意,可在临床推广应用。

【刊名】分析科学学报

全文阅读

去甲肾上腺素(NE)、肾上腺素(E)、多巴胺(DA)及多巴统称为儿茶酚胺类(CAS)物质,作为神经递质和激素与人们的健康与疾病有密切关系。较多的临床工作者越来越注重对儿茶酚胺的深入研究,而选择可靠易行的分析方法是得出准确结果的前提。检测 CAS的分析方法报道很多,方法各有其特点,但因其在灵敏度、选择性及分析速度等方面达不到样品分析要求,使其不能在临床推广应用。高效液相色谱(HPLC)作为检测CAS的重要手段之一,是目前研究最多的检测方法,能够满足痕量和超痕量 CAS的分析,对临床诊断和基础研究具有重大意义。本文采用HPLC分离,荧光检测器检测,不需衍生化,可同时分离测定NE、E和DA三种组分。方法具有较高的灵敏度,稳定性好,前处理简单易行,回收率符合试验要求。1 实验部分1.1 仪器与试剂美国Waters公司液相色谱仪,1525泵,2475荧光检测器,Breese软件系统。去甲肾上腺素、肾上腺素标准品(中国药品生物制品检定所提供),多巴胺标准品(Sigma产品),乙酸乙酯、硫酸、氢氧化钠等试剂均为分析纯。水为双重重蒸馏水并经0.45μm膜过滤。1.2 色谱条件色谱柱:PH BDS C18(150×4.6 mm i.d., 4μm); 荧光检测器:激发波长:λex=285 nm, 发射波长:λem=340 nm; 流动相:0.02 mol/L磷酸二氢钾∶乙腈=98∶2(V/V);流速:1.0 mL/min。1.3 混合标准溶液标准曲线的制作及检出限称取一定量的标准品,用0.2 mol/L乙酸溶液配制去甲肾上腺素:0.16μg/mL,肾上腺素:0.125μg/mL,多巴胺:0.20μg/mL标准溶液。准确吸取一定量的上述混合标准溶液配制成一系列浓度(μg/mL)溶液,进样量:20μL。分别以3种组分相应的浓度为横坐标(X),相对应的峰面积为纵坐标(Y),得出回归方程、线性范围及检出限见表1。1.4 样品前处理方法取10 mL尿液置于50 mL烧杯中,用2 mol/L硫酸调至pH=1.8并转移到分液漏斗中,加入30 mL乙酸乙酯振摇5 min,静止分层,取下层尿液用3 mol/L氢氧化钠调pH=8.3并立即倒入预先称好的 1 g活化后的Al2O3中振摇,使其充分吸附,静止分层,弃去上清液,用 10 mL左右的 2 mol/L乙酸钠溶液洗涤,留下层,再用去离子水洗涤2次,弃去水层,加入的2 mL 0.2 moL/L乙酸溶液,振摇使其充分解析,静止后取上清液过0.45μm膜后用于HPLC测定。Table 1 Linear ranges, regression equations and detect limits for NE,E,DACompoundConcentrationrang(μg/mL)RegressionequationCorrelationcoefficientDetectionlimit(μg/mL)NE 0.16~2.56 Y=166.2+237 610X 0.999 9 2.11×10-3E 0.012 5~2.00 Y=110.8+514 508X 0.999 0 6.47×10-4DA 0.20~3.20 Y=-269.8+157 996X 0.998 5 9.49×10-41.5 方法精密度和回收率试验对同一份尿液样品重复进行5次测定,与样品同步按实验方法精确加入一定量的标准溶液,做加标回收试验,用峰面积外标法定量。结果见表2。Table 2 Precision and recovery of experimentsCompoundAverage(μg/100mL)RSD(%)Added(ng)Found(ng)Recovery(%)NE 0.76 2.1 3.0 2.8 93.3E 0.12 6.4 2.0 1.8 90.0DA 6.73 1.0 3.2 3.0 93.82 结果与讨论(1)本实验方法稳定,重复性好,样品需要较少,前处理方法与其它方法相比较简单、快速,方法灵敏度较高,能满足低含量或超微量CAS的检测,可在临床推广应用。(2)处理方法中“调碱”这一步是因为Al2O3在pH=8.2~8.5条件下吸附CAS能力最强,而 CAS在碱性条件下却不稳定,两者产生矛盾,为此“调碱”过程一定要快、准,否则将会影响检测结果。(3)前处理方法中“震荡和静置”步骤较多,一定要予以足够的时间完成该步骤,否则会造成样品组分分离不好,有可能丢失组分,降低回收率。(4)试验发现用乙酸乙酯萃取时一定要将尿液中杂质充分萃取干净,静置、分离完全,否则对肾上腺素的分离有较大的影响。(5)从对几十份尿液检测结果来看,尿液中(无论是正常人或病人尿液)多巴胺的含量均比去甲肾上腺素和肾上腺素含量高,尿液中去甲肾上腺素和肾上腺素及多巴胺的测定结果与文献报道基本一致。高效液相色谱法测定尿液中儿茶酚胺类物质@乔坤云$新疆农科院分析测试中心!乌鲁木齐830000 @高继玲$新疆医学院第二附属医院儿茶酚胺;;尿液;;高效液相色谱法本文报道用高效液相色谱法(HPLC)分离,荧光检测器检测儿茶酚胺含量的新方法。该法可同时分离测定去甲肾上腺素(NE)、肾上腺素(E)和多巴胺(DA)三种组分,三种组分的浓度与其峰面积均呈良好的线性关系。方法灵敏度高,选择性好,测定结果令人满意,可在临床推广应用。

1

问答

我要提问