小鼠髓系树突状细胞表面疱疹病毒侵入介体表达的变化

作者:蒋玉平;蒋靓;陈曦;张学光;顾宗江 刊名:苏州大学学报(医学版) 上传者:王超

【摘要】目的探讨小鼠髓系树突状细胞(BMDC)共刺激分子疱疹病毒侵入介体(HVEM)表达的变化。方法将促DC成熟活化因子LPS、TNF-α、2A抗体、1c10抗体和免疫负性调节因子IL-10加入到各组BMDC中,观察BM-DC上HVEM表达的变化。结果加入促成熟活化因子的各组BMDC上HVEM表达与对照组明显下调(P<0.05)。而加入免疫负性调节因子的BMDC上HVEM表达较对照组明显上调(P<0.05)。结论促成熟活化因子有下调BMDC上HVEM表达的作用,而免疫负性调节因子有上调BMDC上HVEM表达的作用。

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T细胞的完全活化有赖于双信号和细胞因子的作用。T细胞活化的第一信号来自其受体(TCR)与抗原的特异性结合,即T细胞对抗原识别;T细胞活化的第二信号来自共刺激分子,即抗原提呈细胞(antigenpresentingcell,APC)上的共刺激分子与T细胞表面的相应受体的相互作用[1]。目前已发现的众多共刺激分子主要属于肿瘤坏死因子受体超家族(tumour-necrosisfactorreceptorsuperfamily,TN-FRSF)和免疫球蛋白超家族(immunoglobulinsuper-family,IgSF)。过去认为,家族成员只与家族内部成员间相互作用,而B和T淋巴细胞弱化子(BandTlymphocyteattenuator,BTLA)与疱疹病毒侵入介体(herpesvirus-entrymediator,HVEM)的结合改变了传统的看法,BTLA是IgSF成员,HVEM属于TN-FRSF[2]。HVEM作为配体作用于BTLA介导负性共抑制信号[3]。HVEM可与BTLA结合并诱导其酪氨酸磷酸化,发挥抑制功能,降低T细胞的增殖能力。HVEM-BTLA代表了一对新的负性共刺激分子[4]。但影响树突状细胞(dendriticcell,DC)上HVEM分子表达的因素却未见报道。本研究拟采用小鼠骨髓来源的DC,就影响HVEM分子在DC上表达的因素探讨如下。1材料与方法1.1小鼠6~8周龄C57BL/6小鼠,雌性H-2d,购自中科院上海实验动物中心。1.2抗体及其他试剂PE标记的大鼠抗小鼠HVEM抗体、FITC标记的大鼠抗小鼠CD11c抗体与大鼠抗小鼠CD40激发型抗体1c10购自eBioscience公司,大鼠抗小鼠4-1BB激发型单抗2A(ratIgG2a)由陈列平教授惠赠(JohnsHopkinsUniversitySchoolofMedicine),兔抗大鼠Fc段抗体(crosslink抗体,简称CL)购自Bethyl公司,TNF-购自Immunogenex公司,LPS、小鼠IL-10购自美国Sigma公司,小鼠GM-CSF、小鼠IL-4购自R&D公司。1.3小鼠髓系DC(BMDC)的培养取小鼠胫骨和腿骨骨髓细胞。加入Tris-NH4Cl低渗溶液,约3min,溶解红细胞。PBS洗涤后,以含10ng/ml小鼠GM-CSF、4ng/ml小鼠IL-4的完全培养基(RPMI1640,加入10%FCS,2mmol/L谷氨酰胺,100U/ml青霉素,100U/ml链霉素),调整细胞浓度至5105/ml,加于24孔板中(1ml/孔,),37、5%CO2培养。第3天更换含mGM-CSF及mIL-4的新鲜培养基,分别收集第1、3、5天非贴壁细胞以流式细胞仪测定这些细胞上CD11c和HVEM的表达。1.4BMDC上HVEM表达的调节BMDC培养至第6天收集非贴壁细胞。设置不同IL-10浓度梯度组,在各组加入不同量的IL-10,使各组IL-10终浓度分别为1、4、7、10、100ng/ml,分别作用于BMDC,培养48h后,以流式细胞仪测定各组细胞上HVEM的表达情况。所收集细胞分为6组:(1)对照组:不加任何因子及抗体;(2)LPS组:加入LPS0.5g/ml;(3)TNF-组:加入TNF-10ng/ml;(4)2A抗体组:加入2A抗体5g/ml,孵育30min后加入CL5g/ml;(5)1c10抗体组:加入1c10抗体5g/ml,孵育30min后加入CL5g/ml;(6)IL-10组:加入IL-1010ng/ml。以上各组继续在含mGM-CSF及mIL

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