冠心病患者外周血单个核细胞粒钙蛋白基因表达的变化

作者:赵汉军;山下静也 刊名:心肺血管病杂志 上传者:吴托

【摘要】目的:探讨外周血单个核细胞粒钙蛋白(GCA)基因表达水平与冠心病的关系。方法:连续入选接受冠状动脉造影(CAG)检查的稳定型心绞痛(SAP)患者,对照组为接受CAG检查排除冠心病者。CAG前完成空腹静脉取血进行血常规和超敏C-反应蛋白(hs-CRP)检测、提取总核糖核酸(RNA)并合成互补脱氧核糖核酸(cDNA)进行实时定量RT-PCR(quantitative real-time reveres transcriptase-polyme-rase chain reaction)。结果:SAP组(n=61)糖尿病比例高于对照组(n=53)(34.4%vs15.1%,P<0.05),淋巴细胞分类计数低于对照组(27.2%vs31.7%,P<0.05)。SAP组GCA基因表达水平高于对照组[(1.09±0.41)vs(0.86±0.51),P<0.01]。GCA基因表达水平与hs-CRP以及白细胞分类计数水平均不存在相关性(均P>0.05)。另将样本分为糖尿病组(n=29)和无糖尿病组(n=85)进行比较,2组间GCA基因表达水平差异无统计学意义[(0.97±0.44)vs(0.98±0.48),P>0.05]。结论:稳定型心绞痛患者的外周血单个核细胞GCA基因表达水平升高,提示其持续高表达可能与冠心病有关。

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目前,炎症机制作为动脉粥样硬化(As)的发病机制受到重视。外周血液循环中的几乎所有的有核细胞尤其是炎性细胞(如单核、淋巴细胞、中性粒细胞和浆细胞)都直接或间接参与这一过程[1-3]。现在还不清楚As的原始病因是炎症过程自身还是继发于其他原发因素(如高胆固醇血症等),明确As特异的炎症性信号通路对于寻找治疗的分子靶标非常重要[1]。粒钙蛋白(grancalcin,GCA)是EF-手型钙离子结合蛋白家族的成员,主要在外周血中性粒细胞和单核-巨噬细胞表达,但其功能还不明确[4]。本研究拟通过实时定量RT-PCR(quantitativereal-timereversetranscriptase-polymerasechainreaction)测定外周血单个核细胞GCA基因表达水平,探讨其表达异常与冠心病(CAD)的关系。资料与方法研究对象连续入选临空医疗中心和丰中市立病院接受冠状动脉造影的患者。入选标准:稳定型心绞痛(SAP)组:经冠状动脉造影发现左主干直径狭窄50%,或左前降支、左回旋支和右冠状动脉主支至少1处病变直径狭窄75%;对照组:有胸痛症状或有异常心电图、异常超声心动图表现,但冠状动脉造影未见明显粥样硬化斑块的患者。排除标准:急性冠状动脉综合征、免疫系统疾病、慢性感染性疾病或2周内有感染病史的患者。研究方案获得医院伦理委员会批准并取得患者知情同意书。研究方法冠状动脉造影前抽取空腹静脉血进行血常规和超敏C-反应蛋白(hs-CRP)检测,同时抽取10mL静脉血用于提取总RNA。RNA提取:获取10mL静脉血后立即混合等容积2%右旋糖酐-生理盐水溶液、室温静置30min后回收上清并在4、2000G条件下离心15min。弃上清,异硫氰酸胍法提取总RNA,乙醇沉淀形式保存于-80。实时定量RT-PCR:实时定量RT-PCR仪采用ABIPRISM7900(AppliedBiosystems)。每例患者取10g总RNA用于cDNA合成,使用HighCapac-itycDNAArchiveKit(AppliedBiosystems)。引物与探针(Hs00201854_m1)购自AppliedBiosystems。每次扩增均设有阳性对照、阴性对照和无模板对照,以管家基因3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)作为内参照。每例患者取20ngcDNA作为模板,定量PCR反应体系20L,每个样品均做3个复孔。反应条件为:预变性9510min,变性9515s,退火-延伸601min,重复40个循环。由PCR反应曲线得到域值循环数(CT值),被检测基因表达水平以校正比值表示(检测基因mRNA的拷贝数/GAPDHmRNA的拷贝数)。统计学方法统计分析采用ystat2004软件。正态分布的变量采用均数标准差表示,进行t检验和相关分析。非正态分布变量采用中位数(四分位法)表示,进行Mann-WhitneyU检验和Spearman'srankcorrelation分析。计数资料以百分数表示并行2检验。所有检验为双侧检验,P<0.05为差异有统计学意义。结果一般临床资料:入选114例,SAP组61例、对照组53例,临床特点见表1。其中,SAP组糖尿病比例高于对照组(34.4%vs15.1%,P=0.03)。SAP组合并闭塞性动脉硬化(ASO)和(或)缺血性脑卒中病史比例也高于对照组(19.7%vs0%,P=0.001)。2组间其他基线资料如年龄、性别、吸烟及体质量指数(BMI)、合并高血压或高脂血症情况等均差异无统计学意义(均P>0.05)。白细胞分类计数情况见表2。其中,SAP组淋巴

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