免疫组化染色质量控制在乳腺组织切片中的应用

作者:郭秀芳 刊名:河北医药 上传者:徐梅

【摘要】

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乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,发病率占全身性肿瘤的7%~10%,在女性仅次于子宫癌,已成为威胁女性健康的主要病因。本病的发病与遗传有关,绝经期前后的女性发病率较高,是一种通过发生在乳腺上皮组织严重影响女性身心健康,甚至危及生命的最常见的一种恶性肿瘤之一[1]。由于乳腺的主要成分是脂肪,易造成石蜡切片的不完整性,我们探索自己实验室的工作条件,及各种抗体的实验条件来控制标准化实验流程,稳定乳腺石蜡切片及其免疫组化染色的质量报道如下。1材料与方法1.1材料来自本院临床近2个月送检的乳腺标本,医用可河北医药2010年3月第32卷第5期HebeiMedicalJournal,2010,Vol,32MarNo.5调控16寸高压锅,2000kW电炉。1.2要试剂PBS液(pH值7.4),第一抗体为兔抗人雌激素受体(ER),兔抗人孕激素受体(PR),兔抗人CerbB-2单克隆抗体,第二抗体为快捷免疫组化Elivision试剂盒,DAB试剂盒,均购自福建迈新公司。1.3组织切片的制片乳腺标本经10%中性甲醛充分固定后,取其中病变组织,经过梯度酒精充分脱水,二甲苯透明,58石蜡浸蜡,60石蜡包埋制成蜡块,一次性刀片进行切片,切片厚度为2~3m,40水温展片,水中可加适量的乙醇,因其有张力,使切片能充分展开,无折皱,用经APES防脱片处理过的载玻片捞片。65温箱烤片1~4h。1.4免疫组化染色方法切片烤片后梯度酒精脱蜡至水,蒸馏水洗,PBS液浸泡2min3次,3%的H2O2溶液浸5~10min,以消除内源性过氧化物酶的活性,PBS浸泡2min3次,高压锅内放PBS液,加热至沸腾,把切片置于耐高温塑料切片架上放入锅内,盖上锅盖,扣上压力阀,继续加热至喷气,从喷气开始计时1~2min,压力锅离开水源,冷却至室温,取出切片,我们用二步法使它不含生物素,可以避免由于生物素引起的非特异性背景染色,所以无需血清封闭内源性生物素,将修复后的切片用PBS液洗2次之后,滴加一抗工作液371h,PBS液洗2次后滴加二抗3715~20min,PBS液洗3次后,DAB显色,复染,封片。2结果乳腺组织切片无收缩开裂,组织结构细胞形态清晰,乳腺癌细胞及各种炎症细胞能清晰辨认,HE染色鲜艳,细胞核呈鲜明的蓝色,细胞质被伊红染成深浅不同的粉红色,核仁呈红色,对比度良好,免疫组化染色的结果为病变组织结构完整,无脱片现象,阳性与阴性对比明显,阳性物质定位准确,背景干净清晰[2],无非特异性着色,细胞结构与细胞轮廓完整清晰,染色结果稳定可靠,敏感性高,特异性强,ER、PR在乳腺组织切片中细胞核呈深褐色,CerbB-2在乳腺切片中细胞核呈蓝色,细胞膜呈褐色,镜下呈环状表达。3讨论免疫组化由于其具有复杂性,在技术应用过程中存在不少问题,直接或间接的影响了病理诊断,应予以重视以下几个方面,才能从总体上保证乳腺组织免疫组化染色的质量。3.1制作优质的石蜡切片是做好乳腺癌免疫组化染色的基础,组织固定的好坏是制作免疫组化结果的关键因素。乙醇脱水尽可能从较低浓度起始,以免组织过度收缩常温下二甲苯透明时间30min,不然组织变脆,制定严格按操作程序进行,否则是免疫组化产生假阳性[3]、假阴性或脱片的主要原因。3.2免疫组化切片的质量控制要求,免疫组化染色使用的玻片必须用饱和的重铬酸钾浓硫酸浸泡3d以上,捞出后用水来水彻底清洗干净,再用95%的乙醇过一遍,晾干后涂防脱片剂烘干备用,裱片时切片片膜不能留有气泡,烤片时温度过低、时间过短,则易脱片,温度过高、时间过长则对抗原有破坏,烤片后专用二甲苯、乙醇脱蜡至水洗,脱蜡要彻

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