铅对斑马鱼胚胎发育过程Fgf3基因表达的影响

作者:贾聪聪;林林;刘妮娅;张小晶;张佳佳;杨新军;黄陈平 刊名:中华劳动卫生职业病杂志 上传者:张红见

【摘要】目的 研究铅暴露对斑马鱼胚胎发育过程Fgf3基因表达的影响,以探讨铅的胚胎发育毒性机制.方法 野生型AB品系斑马鱼胚胎暴露醋酸铅浓度分别为0、0.1、0.5、2.5和12.5 μmol/L,提取各组8、12、16、24、36、48及72 hpf(受精后小时)斑马鱼胚胎总RNA,实时荧光PCR检测Fgf3基因定量表达;制备Fgf3基因RNA探针,整胚原位杂交方法检测Fgf3基因空间性表达.结果 在胚胎发育全程中,各组Fgf3表达高峰均在12 hpf(与其他时段比较,P<0.01),随着铅暴露浓度的升高,Fgf3 mRNA 平均表达量也逐渐增加,以对照组Fgf3 mRNA表达量为基准,各铅暴露组(0.1、0.5、2.5和12.5 μmol/L)相对表达量分别为1.02±0.24、1.05±0.26、1.22±0.46和1.25±0.38,其中2.5和12.5μmol/L铅浓度组Fgf3表达量均显著高于对照组(P<0.05);整胚原位杂交结果显示Fgf3主要表达部位是胚胎早期的头、尾部和胚胎中后期的中脑、鳍芽及咽弓部,在胚胎发育至12 hpf时Fgf3阳性杂交信号区域及强度最为明显,但各铅暴露组与对照比较,在Fgf3表达部位及强度上未见明显差异.结论 胚胎期铅暴露能引起Fgf3表达水平上调,改变了胚胎发育过程Fgf3正常表达规律,其可能与铅胚胎发育毒性有关.

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中华劳动卫生职业病杂志 年 月第 卷第 期 ,,, 论 著 铅对 斑马鱼胚胎发育过程 基 因表 达 的影 响 贾聪 聪 林林 刘妮 娅 张 小 晶 张佳 佳 杨 新 军 黄 陈平 【摘要 】 目的 研究铅暴露对斑马鱼胚胎发育过程 基 因表达的影响 ,以探讨铅 的胚胎 发育毒 性机制。 方法 野生 型 品系斑马鱼胚胎暴露醋酸铅浓度分别为 、、、和 ,提取 各组 、、、、、及 (受精后小时 )斑 马鱼 胚胎 总 ,实时荧光 检测 基 因定 量 表达 ;制备 基 因 探针 ,整胚原位 杂交方法检测 基 因空间性 表达 。 结果 在胚胎 发育全 程 中,各组 咯,表达高 峰均在 (与其 他时段 比较 ,),随着铅暴露 浓度 的升 高 , 平均表达量也逐 渐增 加 ,以对 照组 表达量为基准 ,各铅暴露组 (、、和 ) 相 对 表 达 量 分 别 为 、、和 ,其 中 和 ,铅 浓 度 组 表达量 均显 著高于对照组 ();整胚原 位杂交结果显示 主要 表达部位是胚胎早 期的头 、尾部 和胚胎 中后期的中脑 、鳍芽及 咽弓部 ,在胚 胎发 育至 时 阳性杂交信号区域及 强度最 为明显 , 但各铅暴露组与对照比较 ,在 表达部位及强度上未见明显差异 。 结论 胚胎期铅暴露能引起 表达水平上调 ,改变 了胚胎发育过程 正 常表达规律 ,其可能与铅胚胎发育毒性有关。 【关键词 】 铅 ;成纤维细胞生长因子 ;胚胎发育 ;基因表达 , , , , , , :(:、 【】 () () (),,,, ,,,,,, (),’ ’ () , ,,,, ,,,,, () , ; ; 【】 ;;; 铅 是 常 见 的环 境 污染 物 ,是 公认 的 儿 童 认 知 功 能 发育 障碍 的主要 危 险因素 之一 。铅对神 经 系统 : 基金项 目:国家 自然科学基金项 目() 作者单 位 :温州 医学 院环境与公共卫生学院 通讯作 者 :黄陈平 ,: 的 损 害 存 在 一 个 明 显 的 “窗 口效 应 ”,即 在 神 经 发 育 阶段 、尤 其 是胚 胎 发 育 早 期 对 铅 毒 性 十 分 敏感 许 多 后 期 神 经 行 为 异 常 可 归 因于 早 期 的 铅 暴 露 但其 内在 机制并 不 清楚口。成纤 维 细胞 生 长 因子 (,)是 成纤 维 细胞 生 长 因 子 家族 ()中重 要 成员 ,参 与 胚 胎 发 育 调 控 过 中华劳动卫生职业病杂志 年 月第 卷第 期 ,,, 程 。尤 其 在 胚 胎早 期外 胚 层 细胞 向神 经 细胞 诱 导 分 化 过程 中起 着关 键 的作 用 。我们 用荧 光定 量 及 整 胚 原 位 杂 交 技 术 研 究 铅 暴 露 对 斑 马 鱼 胚 胎 发 育 过程 基 因 时空表 达 的影 响 ,旨在探 讨铅 对 胚 胎 发育 毒 性 的作用 机制 。 材料 与方 法 试 剂 与仪器 :醋 酸铅 (美 国 公 司 ), 试 剂 、琼 脂 糖 (碧 云天 生 物技 术 研 究所 ),试 剂盒 、荧 光定量 试剂 盒 (宝 生物工程 有 限公 司 ), 限制 性 内切 酶 (美 国 公 司 ),载 体 、连 接 酶 (美 国 公 司 ),地 高 辛 探 针 标 记试 剂盒 、聚合 酶 (美 国 公 司 )。人 工 气候箱(宁波江南仪器厂 ),仪 (美国 公 司 ),凝 胶 成像 系统 (美 国 公 司 ),微 量 紫外 分 光光度 计 (美 国 公 司 ),荧 光 定量 仪 (美 国 公 司),体 视 显微镜 (日本 公 司

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