3种石斛兰种子非共生萌发和离体保存

作者:余乐;兰芹英;王晓静;马双敏;梁国鲁 刊名:安徽农学通报(下半月刊) 上传者:吴卫春

【摘要】以金钗石斛(Dendrobium nobile)、流苏石斛(D.fimbriatum)和报春石斛(D.primulinum)为研究对象,研究了其在激素浓度配比下种子萌发情况,并对流苏石斛幼苗进行离体保存。结果表明:25℃时,KnudsonC(KC)+BA2mg/L+NAA0.2mg/L最利于金钗和流苏石斛原球茎诱导和幼苗分化;KC+NAA0.5mg/L时最适报春石斛原球茎诱导和幼苗分化。幼苗保存在15℃,每天12h光照(2000lx),添加3%甘露醇(mannitol)的KC培养基中,10个月后存活率为96%。

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石斛属(Dendrobium)是兰科(Orchidaceae)第2大属,多年生草本附生植物,全球约1400余种[1],可作盆花和切花,其中金钗石斛(D.nobile)、流苏石斛(D.fimbriatum)、密花石斛(D.densiflorum)、束花石斛(D.chrysanthum)、美花石斛(D.1oddigesii)等种类兼具药用价值[2]。石斛兰在自然状态下繁殖困难,种子萌发率极低,传统分株繁殖周期长,效率低,加之近年来热带雨林的持续破坏以及人们的过度采挖利用等原因,已被国家列为重点保护的珍稀濒危植物[3]。本文对3种石斛兰进行种子非共生萌发,探讨种子萌发的最适条件,并对流苏石斛的试管幼苗进行了种质保存的研究。将药用石斛的组织快繁与种质保存相结合进行研究,对于缓解药用石斛市场供需矛盾,野生石斛多样性保护和可持续利用具有重要意义和实际应用价值。1材料与方法1.1实验材料中科院西双版纳热带植物园内的金钗、流苏和报春石斛为试材,取其人工授粉后的成熟蒴果进行种子非共生萌发实验。流苏石斛试管幼苗作为离体保存的材料。1.2实验方法1.2.1种子非共生萌发探讨不用激素配比对种子萌发的影响:KC+BA0-2mg/L(单位下同)+NAA0-0.5+蔗糖3%+琼脂0.7%,pH值5.80.1,放置于242、2000lx(12h/d)。1.2.2离体保存将1.5-2cm幼苗转接到保存培养基上,每个处理接种100株,置于50个PC试管中。保存培养基为KC+mannitol1%-5%添加:蔗糖3%、琼脂0.7%,pH值5.80.1。放置于15、光照12h/d(2000lx)保存。1.2.3存活率和恢复率的检测保存3个月起,观察记录存活率。以植株叶片和茎均变为褐黄色的作死亡计算。将存活的幼苗进行增殖培养,能正常生长和增殖的,作恢复率计算。2结果与分析2.1种子非共生萌发植物生长调节剂是培养基中的关键物质,用量虽小,在组培中起着重要和明显的调节作用。试验通过在培养基中添加不同激素配比来研究植物生长调节剂对原球茎诱导和分化的影响。表1表明:不添加任何激素,石斛种子也能诱导出原球茎,但所需时间较长,并且诱导率低,诱导时间推迟了6-14d。适当浓度的激素配比适合在保存第7个月时,部分叶片褐化;3%mannitol组合,保持较好的生长势,叶片呈绿色。3%mannitol组合试管苗保存10个月后存活率达96%,保存效果最好;而1%,5%mannitol和对照组合试管苗存活率分别为68%,40%和28%详见图1。2.3恢复培养保存了10个月的试管苗生长缓慢,将存活的石斛种子的萌发,原球茎诱导与分化。2.2不同浓度的mannitol对流苏石斛离体保存的影响15培养室内保存的流苏石斛试管苗,1%mannitol组合在保存第9个月时开始出现叶片玻璃化并掉落;5%mannitol组合严重抑制幼苗生长,第10个月时叶片几乎全数玻璃化;对照试管苗转接到KC+BA2.0+NAA0.5培养基中进行恢复增殖培养,温度25,光照度2000lx(12h/d)下培养,能正常生长,增殖和恢复率达100%。3讨论石斛种子细若粉尘,(下转69页)(上接28页)一个蒴果内种子数以万计。由于种子缺乏胚乳,自然条件下需与真菌共生才能萌发,繁殖力极低(不足5%)[4],对其非共生萌发的研究具有重要意义。研究表明:25是三种石斛兰的最适培养温度,金钗石斛和流苏石斛种子非共生萌发最适培养条件为KnudsonC(KC)+BA2mg/L+NAA0.2mg/L;报春石斛则为KC+NAA0.5mg/L。保存时间的长短与材料保存前的

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