当归多糖对小鼠骨髓基质细胞黏附分子表达和黏附功能的影响

作者:王改琴;吴宏 刊名:第四军医大学学报 上传者:贾建霞

【摘要】目的:研究当归多糖(APS)对小鼠骨髓基质细胞(BMSCs)生长、粘附分子ICAM-1和VCAM-1表达及其对骨髓单个核细胞黏附功能的影响.方法:观察APS对小鼠BMSCs消化时间的影响;MTT法检测APS对小鼠BMSCs增殖及对骨髓单个核细胞黏附功能的影响;流式细胞术检测APS对BM-SCs表面ICAM-1和VCAM-1表达的影响.结果:100,200mg/LAPS使BMSCs达80%贴壁后消化时间明显缩短(P<0.05);50,100mg/LAPS组BMSCs增殖能力较对照组增强(P<0.05);200,300mg/LAPS能使BMSCs表面ICAM-1表达降低,而50,100,200,300mg/LAPS均可使VCAM-1表达降低(P<0.05);体内注射APS后BMSCs表面ICAM-1和VCAM-1表达均降低(P<0.05);100,200,300mg/LAPS使小鼠BM-SCs对单个核细胞黏附率减弱(P<0.05).结论:APS能促进小鼠BMSCs增殖,降低其表面黏附分子ICAM-1和VCAM-1的表达,进而使小鼠BMSCs达80%贴壁后消化时间明显缩短,对骨髓单个核细胞的黏附率减弱.

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0引言骨髓基质细胞(BMSCs)表面有多种粘附分子,与造血细胞直接粘附,对造血干/祖细胞动员、归巢、增殖与分化起直接支持作用.ICAM-1和VCAM-1是BMSCs表面最常表达的两种粘附分子,与造血干/祖细胞的动员[1-2]和归巢[2-4]密切相关.当归多糖(APS)能够动员造血干/祖细胞从骨髓向外周血迁移[5],其动员作用是否是通过改变粘附分子的表达及其黏附功能来实现有待深入探讨.本研究观察APS是否能促进小鼠BMSCs的生长、改变黏附分子ICAM-1和VCAM-1的表达及其粘附能力进而影响造血干细胞的动员,为改善骨髓造血微环境、促进造血干细胞的动员提供新的思路.1材料和方法1.1材料健康成年未交配BALB/c小鼠,清洁级,雌、雄各半,总数200只,体内实验每组6只,812wk,质量1822g,由重庆医科大学实验动物中心提供.DMDM/F12培养液(Hyclone产品);马血清(Hy-clone公司);胎牛血清(杭州四季青公司);四甲基偶氮噻唑蓝(methylthiazolyltetrazolium,MTT,Hyclone公司);胰蛋白酶(Gibco公司);PE标记抗小鼠CD54(ICAM-1)抗体及其同型对照抗体(eBioscience公司,4保存);FITC标记抗小鼠CD106(VCAM-1)抗体及其同型对照抗体(eBioscience公司,4保存)等.APS由重庆医科大学化学教研室分离提取,纯度950mg/g以上.DMDM/F12培养液配成1g/L的工作液,正压过滤除菌.1.2方法1.2.1BMSCs培养以颈椎脱臼法处死小鼠,用DMEM/F12冲出股骨及胫骨骨髓制成单细胞悬液.将细胞(2109/L)接种于含100mL/L胎牛血清与100mL/L马血清的DMEM/F12培养体系中(常规加入青霉素和链霉素,使其含量分别达1105U/L),置37,50mL/LCO2培养箱内孵育.3d后全量换液,以后每3d换液1次,待BMSCs生长成层后备用并进行鉴定[6].1.2.2APS体外对小鼠BMSCs消化时间的影响APS浓度分别为0,50,100,200mg/L,分别作用小鼠BMSCs24,48,72h,用2.5g/L的胰酶消化细胞,观察APS对小鼠BMSCs消化时间的影响.1.2.3APS体外对小鼠BMSCs增殖能力的影响APS作用于小鼠BMSCs的时间分别为0.5,1.5,3.5,7d,浓度分别为0,25,50,100,200,300mg/L,采用MTT法检测APS对小鼠BMSCs增殖能力的影响.1.2.4APS体外对小鼠BMSCs黏附分子表达的影响0,50,100,200,300mg/LAPS作用于小鼠BM-SCs12,24,36和48h后,用流式细胞术检测黏附分子ICAM-1(CD54)和VCAM-1(CD106)表达的变化.1.2.5APS体外作用于小鼠BMSCs后对小鼠骨髓单个核细胞黏附功能的影响将原代BMSCs接种到96孔培养板中(2109/L),APS浓度分别为0,50,100,200,300mg/L,作用时间分别为0.5,1.5,3,5d,然后加入小鼠骨髓单个核细胞,其细胞密度为5109/L,继续孵育2h.轻轻洗去未黏附的细胞,加入MTT溶液,继续孵育4h,细胞内甲膳形成,加入DM-SO溶解,在酶标仪上测定A570nm值.对照组不加APS,方法同前.计算公式:黏附率(%)=(BMSCs与黏附在BMSCs上单个核细胞总A570nm值-BMSCsA570nm值)/悬浮单个核细胞的总A570nm值100%.1.2.6APS体内对小鼠BMSC

参考文献

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