多花脆兰非共生萌发和离体保存的初步研究

作者:罗远华;许奕;陈彩丽;莫饶;陈业渊 刊名:福建农业科技 上传者:李祥晓

【摘要】研究了多花脆兰种子的非共生萌发和植株再生,以及原球茎的常温离体保存,结果表明:多花脆兰种子在花宝1号、MS培养基上培养35 d萌发率95%以上,在花宝1号培养基上可进行增殖及植株再生;蔗糖浓度为10 g/L时对离体保存有利,甘露醇浓度为50 g/L时抑制正常生长,添加B9有利于多花脆兰的离体保存。

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多花脆兰是脆兰属大型附生兰科植物,茎粗壮,近直立;叶肉质;花序腋生或与叶对生,花黄色带褐色横纹,具香气,是一种观赏价值较高的野生兰。由于原始森林不断遭破坏,多花脆兰栖息地严重丧失,自然分布急剧减少。对多花脆兰种子的非共生萌发及离体保存进行研究对种质源资的保护及开发利用都有积极意义。非共生萌发(无菌萌发)是以卡特兰与雷丽兰杂交的种子在无菌培养基上成功萌发而实现的[1],是兰科植物种子萌发的主要方法。Homes等(1982)首先报道了兰属植物原球茎的低温保存[2]。我国学者对铁皮石斛[2-5]、金钗石斛[6]、独占春[7]等进行了种质离体保存研究。目前,在兰属、石斛兰属、香夹兰属、苞舌兰属、万代兰属、白及属等兰科植物上开展了种质资源的离体保存研究[2]。多花脆兰非共生萌发及离体保存尚未见报道。本研究基于植物组织培养技术,初步建立了多花脆兰的无菌播种及离体保存技术。1材料与方法11材料多花脆兰成熟种子。12方法121蒴果的消毒及无菌播种将成熟但未开裂的蒴果表面用自来水冲洗干净后,在超净台上用手术刀削除病斑,用75%(V/V,下同)的酒精擦洗表面,然后置入95%的酒精中浸泡数秒后取出灼烧灭菌,以表面酒精烧干即可(重复2~3次)。将消毒好的蒴果切开,将种子均匀播撒在原球茎诱导培养基上培养。122原球茎的诱导培养基为MS、1/2MS、花宝1号(花宝1号3g/L+水解乳蛋白1g/L,下同)3种固体培养基,均添加BA05mg/L、NAA01mg/L、香蕉泥50g/L、AC(活性炭)1g/L、蔗糖20g/L,pH54~56。培养温度(262),光照强度1000~1500lx,光照时间10~12h/d。123原球茎的增殖及植株再生原球茎增殖培养基为MS、花宝1号2种固体培养基,均添加BA5mg/L、NAA05mg/L、香蕉泥50g/L、AC1g/L、蔗糖30g/L。分化及生根培养基均为花宝1号,并附加BA10mg/L、NAA05mg/L、土豆泥100g/L、蔗糖30g/L、AC2g/L。以上培养基pH54~56,培养温度(262),光照强度1500~2000lx,光照时间12~15h/d。124离体保存以花宝1号+BA05mg/L+NAA01mg/L+AC1g/L+蔗糖30g/L,pH54~56作为对照培养基,对蔗糖、甘露醇和丁酰肼(B9)做单因子试验。添加蔗糖浓度为10g/L、50g/L;添加甘露醇浓度为10g/L、30g/L、50g/L、70g/L;添加B9浓度为1mg/L、3mg/L、5mg/L、7mg/L,培养温度(262),光照强度1000~1500lx,光照时间10~12h/d。用生长一致的原球茎作为试验材料,重复2次,培养6个月后观察其生长发育情况。2结果与分析21种子萌发多花脆兰成熟但未开裂的蒴果体积较大、果皮厚实且较光滑,采用灼烧灭菌操作简便,且不用化学杀菌剂,是多花脆兰蒴果理想的灭菌方法。经过35d的培养,在花宝1号和MS培养基上萌发效果好,萌发率达95%以上,原球茎呈浅黄色;1/2MS培养基上基本不萌发。22原球茎的增殖与植株再生诱导出的原球茎转接到花宝1号和MS培养基上进行增殖培养。经过40d培养,在花宝1号培养基上长势良好,增殖率可达3,原球茎呈绿色并开始分化出叶片;在MS培养基上绝大部分原球茎逐渐褐化变黑,最后死亡。未分化的原球茎可继续进行增殖培养获得大量的原球茎,把已开始分化的原球茎转接到分化培养基上经40d培养可完全分化出小苗。将小苗接种到生根培养基上培养,生根的同时可实现壮苗,经60d培养可得到具有3~4片叶、2~3条根的完整小苗。

参考文献

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