阿托伐他汀对HepG_2细胞中脂代谢相关基因表达的影响

作者:王艳丽;黄鸣宇;张鹏; 刊名:吉林大学学报(医学版) 上传者:吴鸣鸿

【摘要】目的:探讨阿托伐他汀对HepG_2细胞中载脂蛋白A1 (apoA1)天然反义转录(apoA1-NAT)的作用及对脂代谢相关基因表达的影响。方法:采用不同浓度阿托伐他汀(0、1、10和100nmol·L~(-1))干预HepG_2细胞,0nmol·L~(-1)阿托伐他汀组为对照组,在不同时间点(6、12、24和48h)提取各组HepG_2细胞总RNA,采用Real-time PCR法检测HepG_2细胞中apoA1-NAT和脂代谢相关基因mRNA表达水平。结果:1和10nmol·L~(-1)阿托伐他汀组HepG_2细胞形态正常。与6h时比较,12、24和48h时10nmol·L~(-1)阿托伐他汀组HepG_2细胞中apoA1-NAT表达水平明显降低(P<0.01),且呈明显的时间依赖性。在相同条件下,48h时HepG_2细胞中apoA1mRNA表达水平较6h时明显升高(P<0.01)。与对照组比较,100nmol·L~(-1)阿托代他汀组HepG_2细胞中低密度脂蛋白受体(LDLR)、10nmol·L~(-1)阿托代他汀组HepG_2细胞中清道夫受体B1(SRB1)及1和10nmol·L~(-1)阿托伐他汀组HepG_2细胞中ATP结合盒式转运体A1 (ABCA1)表达水平均有不同程度升高(P<0.01)。结论:阿托伐他汀通过抑制HepG_2细胞中apoA1-NAT表达,促进脂代谢相关基因表达,进而促进胆固醇逆转运过程。

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动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是心血管系统疾病的主要病理学基础。AS的发生与脂质代谢紊乱、高血压、糖尿病和胰岛素抵抗等多种因素有关[1-2],其中脂代谢紊乱是AS的主要致病因素。流行病学资料[3-4]显示:高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)与AS的发生呈负相关关系,因此升高HDL-C抗AS的策略亦是研究者致力探索的目标。目前研究[5]表明:HDL-C颗粒组成比HDL-C水平更重要。HDL-C颗粒包含磷脂、胆固醇、载脂蛋白A1(apolipoprotein A1,apoA1)、apoA2、apoC和apoE等成分,其中apoA1约占70%,为HDL-C颗粒的主要成分[6-7]。apoA1在胆固醇逆转运(reverse cholesterol transport,RCT)过程中发挥重要作用。经典的RCT过程:外周组织游离胆固醇经ATP结合盒式转运体A1 (ATP bindingcassette transporter A1,ABCA1)及ATP结合盒式转运体G1 (ATP binding cassette transporterG1,ABCG1)受体流出,与apoA1结合,apoA1可激活卵磷脂胆固醇酰基转移酶(lecithincholesterol acyltransferase,LCAT),并在LCAT催化下形成前β高密度脂蛋白(preβ-HDL),再经LCAT进一步酯化形成成熟的HDL-C,最后经肝脏表面的清道夫受体B1 (scavenger receptor-classB type 1,SRB1)摄取代谢。因此,apoA1在HDL-C形成及RCT过程中发挥重要作用[8]。近年来,随着分子生物学技术的发展,长链非编码RNA (long non-coding RNAs,lncRNAs)在心血管系统疾病研究中越来越受到关注[9]。目前研究[10]显示:存在一段lncRNA为apoA1的天然反义转录(apoA1 natural antisense transcripts,apoA1-NAT),可与apoA1基因结合而抑制其转录。然而apoA1-NAT在AS发生发展中的作用目前尚不清楚。阿托伐他汀(atorvastatin)是目前应用最广泛的降血脂保护心血管药物,可降低血浆低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL)及甘油三酯水平,还可刺激肝脏表面LDL受体(LDLreceptor,LDLR),使其数目增多和活性增强[11]。本研究利用阿托伐他汀干预HepG2细胞,观察其是否能抑制apoA1-NAT表达,进而升高apoA1,促进脂代谢相关基因表达,为探索抗AS新的治疗靶点提供理论依据。1材料与方法1.1主要试剂阿托伐他汀购自美国Sigma公司,胎牛血清购自美国Gibco公司,RPMI-1640和双抗购于美国康宁公司,RNA提取试剂盒购于天根生化科技(北京)有限公司,反转录及荧光定量试剂盒购于大连宝生物TaKaRa公司。1.2 HepG2细胞培养取西安医学院基础医学研究所中心实验室液氮冻存的HepG2细胞,于37℃水浴快速溶化,将冻存管中的液体转移至已加入10mL培养液的离心管中离心,弃上清液,加入1mL培养液,吹打细胞使之成为单细胞悬液,将离心管中的细胞转移至25cm2培养瓶中于37℃、5%CO2的培养箱中培养。待细胞密度至90%时传代培养。传代细胞密度至90%时,选取1瓶细胞进行冻存,未冻存细胞继续传至3~5代时用于实验。1.3细胞

参考文献

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