HPLC法测定健肝颗粒中绵茵陈成分绿原酸的含量

作者:周淑群;李明艳;周定球 刊名:中国现代药物应用 上传者:姜南

【摘要】目的建立健肝颗粒中绿原酸的含量测定方法。方法采用高效液相色谱法,色谱条件:Diamonsil-C18柱(250mm×4.6mm,5um);流动相为乙腈-0.4磷酸溶液(20:80);流速0.8ml/min;检测波长336nm;柱温30℃。结果绿原酸在9.03~180.6ug/ml范围内,其峰面积值与进样量有良好的线性关系,r=0.9995,平均加样回收率为99.7%,RSD为0.71%。结论该测定方法快速简便,重现性好,可用于健肝颗粒的质量控制。

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健肝颗粒是由甘草、黄花母、虾钳草、黄鳝藤、田基黄、绵茵陈,六味中药制成的制剂,用于治疗急、慢性肝炎。为了有效控制该制剂的质量,本文参照有关文献[1,2],建立高效液相色谱法测定其中绿原酸含量的方法,结果显示该方法简便,精密度好,重复性好,可用于本制剂的质量控制。现介绍如下。1仪器和试药日本岛津LC-10AT高效液相色谱仪,SPD-10A检测器,CLASS-VP6.12SPI色谱数据系统,UV-24010PC紫外分光光度计(日本岛津),北京赛多利斯BP211D电子分析天平,0412-1离心机,B2500S-MT超声波清洗机。绿原酸对照品(中国药品生物制品检定所,批号:110753-200413)乙腈、甲醇均为色谱纯,水为注射用水。健肝颗粒剂由本院生产(批号:110104,110107,110112)。2处方与制备取甘草25g,黄花母100g,虾钳草100g,黄鳝藤100g,田基黄100g,绵茵陈100g,尼泊金0.5g,总制成100g。将上述药材加水浸泡24h,煎煮两次,每次1h,除药渣后浓缩成流浸膏(相对密度1.2),加蔗糖粉(过40目筛),制软材、制粒、干燥、整粒,即图得1。健肝颗粒的HPLC图A-健肝颗粒剂样品;B-阴性样品;C-标准品;1-绿原酸3方法与结果3.1色谱条件色谱柱:Diamonsil-C18柱(250mm4.6mm,5um),流动相:乙腈-0.4%磷酸溶液(2080),流速0.8ml/min,检测波长336nm,柱温30,进样量20l。在此色谱条件下,添加剂无干扰。色谱图见图1。由图可见,在此色谱条件下,绿原酸的保留时间为7.9min出峰良好,无干扰。3.2溶液的制备3.2.1标准品溶液精密称取绿原酸对照品适量,加50%甲醇溶解、稀释、定容,制成1.806mg/ml的储备液。3.2.2供试品溶液取供试品约1g,研成细粉,精密称定,置25ml棕色容量瓶中,加50%甲醇定容,摇匀,超声30min后取出,放至室温,定容,摇匀,取5ml离心,取上清液用针式过滤器过滤,进样。3.2.3阴性样品溶液除绵茵陈外,其余各药按处方比例依工艺制成阴性样品,再按供试品溶液制备方法,制得阴性供试品溶液。3.3系统适用性实验分别精密吸取对照品、供试品溶液、阴性对照品溶液,在上述色谱条件下进样,记录色谱图,结果绿原酸色谱峰与其他杂质峰得到较好的分离,分离度均大于1.5,阴性对照无干扰,色谱图见图1。3.4线性关系分别精密量取绿原酸对照品贮备液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml置10ml容量瓶中,用甲醇稀释到刻度线制成对照品溶液,分别进样,以浓度为横坐标(X),峰面积为纵坐标(Y),进行线性回归,得绿原酸的标准曲线为y=70900x+62527(n=6,r=0.9995),线性范围是9.03~180.6ug。3.5回收率试验取6份已知含量的样品适量,加入一定含量的对照品溶液,按“供试品溶液的制备”项下处理,在上述色谱条件下,测定加样回收供试品溶液中绿原酸的含量。计算绿原酸加回收率,结果见表1。表1绿原酸的加样回收率试验结果(n=6)样品中的量(mg)加入量(mg)测得量(mg)回收率(%)平均回收率(%)RSD(%)0.40600.36120.770999.599.680.710.40960.36120.766599.40.41110.36120.7666100.70.41810.36120.768598.60.40740.36120.767599.80.41470.36120.7769100.13.6精密度试验取一份中间浓度的对照品溶液,

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