病毒性心肌炎患者外周血T淋巴细胞亚群及B淋巴细胞的研究

作者:董新;张岩;王聪霞;张春艳;路艳;李永勤;陈俊亮 刊名:心脏杂志 上传者:单科科

【摘要】目的:测定不同时期病毒性心肌炎(VMC)患者T淋巴细胞亚群及B淋巴细胞的数量,并同时检测患者血清心肌损害标志物心肌肌钙蛋白I(cTnI)的水平,探讨其在VMC发病机制中的作用。方法:采用流式细胞术检测不同时期VMC患者(n=126)外周血CD4+CD45RA+和CD4+CD45RO+以及CD19+的表达,并设正常人群作为对照组(n=50)。结果:急性期(<3个月)患者CD4+CD45RA+和CD4+CD45RO+以及CD19+与对照组相比差异显著。<1个月以CD4+CD45RA+和CD4+CD45RO+为著(P<0.01;P<0.01)。病程<7 d的患者与对照组相比,CD4+CD45RA+值的降低具有显著性(P<0.01);CD4+CD45RO+值下降明显(P<0.01)。而病程7~14 d、14~21 d及21~30 d的患者CD4+CD45RA+值、CD4+CD45RO+值及CD19+值与对照组相比差异均有统计学意义,CD4+CD45RO+值恢复较快。CD4+CD45RA+/CD4+CD45RO+在发病14 d内的患者与对照组差异无统计学意义;而14~30 d的患者与对照组相比差异有显著性。发病1~3个月患者以CD19+为著(P<0.01)。急性期CD4+CD45RA+/CD4+CD45RO+细胞的比例失衡。恢复期(3~12个月)患者CD4+CD45RA+和CD4+CD45RO+以及CD19+、CD4+CD45RA+/CD4+CD45RO+细胞的比例与对照组相比差异无显著性。结论:VMC患者感染初期(<1个月)以T淋巴细胞亚群异常为主,感染后期(1~3个月)以B淋巴细胞异常较为显著,以上两时期均存在CD4+CD45RA+/CD4+CD45RO+细胞比例失衡。恢复期(3~12个月)T淋巴细胞及B淋巴细胞逐渐恢复至正常。

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病毒性心肌炎(viralmyocarditis,VMC)的发病机制十分复杂,目前尚不明确。细胞免疫参与发病过程的机制已得到大多数学者的公认[1]。病毒感染后,心肌抗原性改变及免疫功能紊乱的确切机制尚未完全阐明,加之对VMC的免疫抑制治疗并未取得预期疗效,因此,本研究探讨了免疫反应在VMC发病中的作用,其结果将为病毒性心肌炎的免疫疗法提供有效的指导。1对象和方法1.1对象选择2008年1月2009年6月诊断为VMC的患者126(男57,女69)例(患者组),均符合文献[2]报道的标准,其中年龄(1546)岁,平均28.3岁,监测前未接受激素及免疫调节剂治疗;选取健康志愿献血者50(女30,男20)名作为对照组,年龄(1942)岁,平均29.1岁。以上研究对象均排除艾滋病、病毒性肝炎和自身免疫病。1.2材料流式细胞仪(EpicsXL-4)为BeckmanCoulter公司生产。异硫氰酸荧光素(FITC)标记的抗CD4mAb、FITC标记的抗CD45RAmAb、藻红蛋白(PE)标记的抗CD45ROmAb及红细胞溶解素均为Immunotech公司的产品。1.3方法1.3.1实验分组将病例组按病程长短分为<1月(68例)、13月(33例)、312月(25例)3个组,其中<1月组的患者根据发病时间又分为病程为<7d(10例)、714d(15例)、1421d(27例)、2130d(16例)的4个组。对照组为健康志愿献血者50例。所有实验对象均分别于入院后早晨抽取空腹外周血2ml,用乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝后,于2h内检测。1.3.2外周血T、B细胞的流式细胞仪检测选取3个试管,分别加入FITC标记的抗CD45RA+mAb(FITC-抗CD45RA+mAb)、PE标记的抗CD45RO+mAb(PE-抗CD45ROmAb)、FITC标记的抗CD19+mAb(FITC-抗CD19mAb)各20l,加入EDTA抗凝全血100l,混匀置室温暗处20min。然后加入红细胞溶解素2ml溶解红细胞8min,以300r/min离心5min,用PBS洗涤2次后,加0.5ml含10g/L多聚甲醛的PBS固定,计数1104个细胞。经BD公司的FACSCalibur流式细胞仪获取样本,CellQuest软件进行分析。1.3.3血清心肌肌钙蛋白I(cTnI)的电化学发光法检测采用电化学发光法测定血清中cTnI的水平,应用罗氏Elecsys全自动电化学发光免疫分析仪进行分析。使用原装进口试剂盒,其参考值cTnI>0.4g/L为阳性。1.4统计学处理检测结果均以xs表示,采用SPSS17.0统计学软件分析。组间比较采用单因素方差分析(F检验),方差分析的P<0.05时做多个样本均数的两两比较(SNK-q检验),P0.05者为差异有统计学意义。2结果2.11年内不同时期外周血中T细胞亚群和B细胞的检测与对照组相比,病程1个月内、13个月内,VMC患者T细胞亚群(CD4+CD45RA+T细胞和CD4+CD45RAO+T细胞)明显减少(P<0.01),但随着时间的推移T淋巴细胞的数呈上升的趋势。B细胞的数也明显减少(P<0.01);CD4+CD45RA+T细胞/CD4+CD45RO+T细胞的比值有所下降,但无统计学差异。提示VMC早期T细胞亚群和B细胞的数均下降(表1)。表1VMC患者外周血T淋巴细胞亚群及B细胞的测定(xs)组别nCD4+CD45RA+T细胞CD4+CD45RO+T细胞CD19+B细胞CD45RA+T细胞/CD45RO+T细胞<1月6829.263.98b35.174.37b

参考文献

引证文献

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