金丝桃苷对四氯化碳诱导肝细胞损伤的保护作用

作者:唐敏;刘耀;夏培元 刊名:中国药业 上传者:郑文良

【摘要】目的研究金丝桃苷(hyperfine,HP)对四氯化碳(CCl4)诱导肝细胞损伤的保护作用及其机制。方法用CCl4体外诱导人正常肝细胞L-02损伤,检测培养上清液中天门冬酸氨基转移酶(AST)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平,测定肝细胞中丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)的含量,四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色(MTT)法检测肝细胞存活率。结果金丝桃苷可明显降低由CCl4升高的肝细胞培养上清液中ALT和AST水平及肝细胞MDA含量,还可提高由CCl4降低的肝细胞存活率和GSH含量。结论金丝桃苷对人肝细胞氧化性损伤有直接保护作用,这可能与金丝桃苷抑制抗氧化酶活性和抗自由基活性有关。

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肝脏损伤是指由多种有害因子和物质引起的肝脏病理和生理异常,每年因肝病死亡的人数约为30万人,但目前尚无可有效减轻肝脏损伤和促进肝细胞再生的药物。金丝桃苷(hyperin,HP)广泛存在于藤黄科、杜鹃花科、豆科及卫矛科等多种植物的黄酮醇苷化合物中,已在20多种植物中被发现。药理研究表明,金丝桃苷具有较好的镇痛、免疫调节等作用,以及较强的抗氧化作用,本研究旨在探讨金丝桃苷对四氧化碳(CCl4)诱导化学性肝细胞损伤的保护作用及其机制,现报道如下。1仪器与试药722s型分光光度计(上海精密科学仪器有限公司);450型酶批号为111521-200303);CCl4购于Sigma公司;天门冬酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)测定试剂盒(南京建成生物工程研究所,批号分别为20070312,20070402,20071029,20071010);噻唑蓝(Amresco公司,北京拜尔迪生物公司分装);二甲基亚砜(DMSO,天津化学试剂有限公司)。2方法与结果2.1诱导肝细胞损伤所需CCl4适宜浓度的确定取对数生长期L-02人肝细胞,消化后用RPMI-1640培养液调整细胞密度为5104/mL,肝细胞活力大于90%。加入96孔培养标仪(美国Bio-Rad公司)。金丝桃苷(中国药品生物制品检定所,板中,每孔100L细胞悬液,于37及5%CO2培养箱中培养24h,表2金丝桃苷对CCl4损伤肝细胞培养上清液ALT及AST测定结果(U/L)组别ALTAST空白对照组维生素E对照组CCl4模型组金丝桃苷160g/mL组金丝桃苷80g/mL组金丝桃苷40g/mL组金丝桃苷20g/mL组金丝桃苷10g/mL组金丝桃苷5g/mL组155.337.06163.834.79235.1712.98*187.836.88*161.177.11177.175.56*184.835.27*186.835.91*199.835.12*73.333.3378.175.85152.673.50*92.334.0880.173.6686.833.66*99.175.27*104.834.26*115.833.76*肝细胞全部贴壁生长后待用。以CCl4原液4.82mL溶于DMSO5.18mL,制成5mol/L的CCl4液,以含10%胎牛血清的RPMI-1640液稀释配成含2.5,5.0,10.0,15.0,20.0,30.0mmol/LCCl4的表1不同浓度CCl4损伤后肝细胞MTT检测结果(n=5)组别光密度注:与空白对照组比较,*P<0.01;与CCl4模型组比较,P<0.01(表3同)。表3金丝桃苷对CCl4损伤肝细胞MDA及细胞存活率的影响空白对照组溶液。加入96孔培养板,以无CCl4的RPMI-1640培养基为空白对照。每个浓度做5个平行孔,培养24h后,以四甲基偶氮唑蓝微量酶反应比色(MTT)法测肝细胞存活率。以空白对照为标准,CCl4浓度为2.5mmol/L时,MTT检测显示肝细胞存活率为90.9%,显微镜下细胞形态改变不明显。随着CCl4浓度的升高,肝细胞存活率逐渐降低,且肝细胞逐渐出现核溶解、细胞膜破损、细胞结构不清。当CCl4浓度达到组别空白对照组维生素E对照组CCl4模型组金丝桃苷160g/mL组金丝桃苷80g/mL组金丝桃苷40g/mL组金丝桃苷20g/mL组金丝桃苷10g/mL组金丝桃苷5g/mL组MDA(mmol/L)12.030.2612.450.4621.450.86*14.770.48*13.720.3614.

参考文献

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