拮抗酵母菌对苹果采后青霉病的防治效果

作者:赵文亚 刊名:安徽农业科学 上传者:乔海林

【摘要】[目的]为拮抗菌的商业化贮藏应用提供依据。[方法]通过室内培养筛选出2株具有拮抗效果的酵母菌,通过活体和离体试验,研究拮抗酵母菌对青霉引起的苹果采后病害的防治效果。[结果]活体条件下,含量为2×108CFU/ml的2株酵母菌对青霉菌具有较明显的抑制效果,其中菌株1的防效为89%,菌株2的防效为92%;离体条件下,含量为106CFU/ml的2株酵母菌可完全抑制青霉菌生长;用酵母菌菌悬液浸果后,贮藏20 d时苹果未出现腐烂现象,20 d后酵母菌菌株2在苹果上的数量为初始值的15.0倍,菌株1在苹果上的数量为初始值的10.2倍。[结论]2株酵母菌均可在苹果伤口上迅速繁殖,可有效防治苹果青霉病。

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果蔬采后腐烂造成的严重损失已成为全球性问题。最常用的控制果蔬采后腐烂的方法是化学杀菌剂处理,但长期使用化学杀菌剂易引起病原菌的抗药性,并影响果蔬的食用安全,造成环境污染[1]。近年来,生物防治已成为果蔬采后腐烂的主要防治方法,其中拮抗微生物,尤其是来自果蔬表面的拮抗酵母菌对果蔬采后病害具有很好的防治效果[2]。果实采后病害生物防治的主要原理是利用微生物之间的拮抗作用,达到抑制病原微生物生长、减少腐败的目的[3]。据报道,多种拮抗酵母菌可有效抑制果实采后病害的发展[4-7],其中PichiaguilliermondiiWicherham和CandidaoleophilaMontrocher已经实现商品化生产。然而,这些产品并不能满足我国农业生产的需求,筛选出更多具有更好防治效果的酵母菌已成为当务之急。笔者从苹果表面分离并筛选出2株酵母菌,并在活体和离体条件下,研究了其对苹果青霉病的防治效果及其在苹果果面上的定殖情况,以期为拮抗菌的商业化贮藏应用提供科学依据。1材料与方法1.1试验材料供试苹果品种为“红富士”。选成熟度好、大小均一、无病虫害的果实,用20g/L次氯酸钠消毒2min后用自来水冲洗,自然晾干后备用。1.2试验设备HD-650型洁净工作台,苏州净化设备有限公司;DHG-9141A型电热恒温干燥箱,上海精宏实验设备有限公司;BCD-215KCJC型冰箱,青岛海尔股份有限公司;JT201N型电子天平,上海精天电子仪器有限公司;TP系列智能蒸汽灭菌器,百奥仪器;HWS智能型恒温恒湿培养箱,宁波江南仪器厂;QL-901型Vortex,基林贝尔仪器制造公司;SHP-250型生化培养箱,上海精宏实验设备有限公司;SK3200H型超声波清洗器,上海科导超声仪器有限公司;SHZ-82型气浴恒温振荡器,上海金鹏分析仪器有限公司。1.3试验方法1.3.1酵母菌的分离。每次选2个果实称取10g果皮于装有90ml豆芽汁葡萄糖液体培养基的250ml三角瓶中,同时加入3000单位的链霉素,28条件下置于200r/min的摇床上培养48h,然后用稀释平板法将酵母菌悬液逐级稀释,最后分别取0.1ml10-5、10-6、10-7浓度的富集培养液涂布于倒有豆芽汁葡萄糖琼脂培养基的平板上,每稀释度重复3次,置于28恒温培养箱中培养48h,挑取培养特征各异的单菌落进行平皿划线。从培养过的培养皿中选取分离较好、形态各异的酵母菌菌落转接斜面。在转接斜面的同时制片进行纯度检查,若不纯,则进一步挑取此菌落制成菌悬浮液进行稀释分离,直至获得纯培养。根据菌落特征和光学显微镜下的菌体形态特征从中选出2株酵母菌。1.3.2青霉菌的分离。按照柯赫氏法则,青霉菌分离于自然发病的果实伤口处。从病斑直接挑取病菌孢子在PDA培养基平板上划线进行纯化培养,同时观察菌落形态并在光学显微镜下观察菌体的分生孢子形态。1.3.3活体(invivo)试验。将2株酵母菌用无菌水冲洗,配制成108CFU/ml的酵母菌悬浮液备用。用打孔器在每个果实中上部打6个8mm(宽)3mm(深)的伤口。其中4个孔先接种20l2108CFU/ml的酵母菌悬浮液,2h后再接种20l1.6104孢子/ml的病原菌孢子悬浮液,另外2个孔分别以病原菌和无菌水接种作为对照,晾干后将果实放入托盘上,置于相对湿度95%、温度28的恒温培养箱中。5d后测定果实的发病情况和病斑直径。每处理2个果实,3次重复。酵母菌防效(%)=(对照病斑直径-处理病斑直径)/对照病斑直径100。1.3.4离体(invitro)试验。1.3.4.1混菌试验。将2种酵母菌分别

参考文献

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