2型糖尿病PAI-1基因启动子区4G/5G基因多态性与胰岛素抵抗

作者:魏蓉;吴国亭;于永春;汪纯;盛春君;韩玉麒 刊名:同济大学学报(医学版) 上传者:吴艳萍

【摘要】目的探讨2型糖尿病血浆纤溶酶原激活物抑制物(PAIΙ)及其基因启动子区4G/5G多态性及其胰岛素抵抗的关系。方法对近2年来我院诊断为2型糖尿病的住院患者156例,通过检测血浆纤溶酶原激活物抑制物(PAIΙ),并进行PCR扩增PAI1基因启动子区4G/5G基因多态,同时测定血糖水平、糖化血红蛋白(GhbA1)、空腹血胰岛素、血浆胆固醇、甘油三脂,并与有关因素作相关分析研究PAI1与胰岛素抵抗的关系。结果(1)T2DM组与正常组相比,PAI1基因型频率分布有明显的统计学差异,等位基因频率无明显统计学意义。(2)2型糖尿病组4G/4G组PAI1水平显著高于其他两组。(3)对照组中3组基因型的PAI1水平、TCH、TG、LDLC、HDLC、空腹胰岛素、HOMA差异均无显著性。(4)T2DM组3组基因型的PAI1水平、TCH、TG、LDLC、HDLC、FBG、空腹胰岛素、HOMA均明显高于对照组中相应基因型者。在4G/4G组,PAI1水平与BMI、TG、空腹胰岛素、WC、HOMA都有关。结论在2型糖尿病中,PAI1水平与PAI1基因启动子区基因型有关;PAI1水平与胰岛素抵抗有关,且PAI1水平和甘油三酯和空腹胰岛素的关系与PAI1基因启动子区基因型有关。

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凝血纤溶系统的紊乱与胰岛素抵抗对血栓形成起重要作用,对糖尿病出凝血系统的监测有利于预防各类血管并发症的发生。本文通过研究个体的基因型,结合胰岛素、血糖、糖化血红蛋白等临床生化指标,探讨该多态性与我国上海地区2型糖尿病胰岛素抵抗的关系。1资料与方法1.1一般资料2型糖尿病组:随机选取2003年2月到2004年5月期间我院诊断为2型糖尿病的住院患者156例。男性74例,女性82例,年龄(60.7810.74)岁;正常对照组:60例为在我院进行健康体检的人群,无心脑血管疾病及糖尿病、高血压病史,年龄5565岁,平均年龄(59.629.65)岁。采血前一周无服药史,均否认糖尿病家族遗传史。1.2试剂Promega公司基因组试剂盒,MBI公司PCR试剂盒。1.3方法(1)生理指标和临床指标的采集:所有入选者均测定空腹血脂(包括血浆胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白)、血糖、空腹血胰岛素、C肽,糖化血红蛋白(GHbA1)、纤溶酶原激活物抑制物(PAI),记录年龄、性别、患病情况、血压、身高、体重、腰围、臀围,并计算体重指数。PAI水平测定采用酶联免疫吸附双抗体夹心法。血糖血脂均经本院检验科统一空腹抽血采用生化法测定。血浆胰岛素采用电化学发光法测定。采集静脉血1ml,装入加有10lEDTA-K2抗凝的1.5ml塑料离心管中,上下颠倒混匀,以备进行基因组DNA的抽提。(2)计算HOMA指数和体重指数:HOMA-IR=[空腹血浆胰岛素(mU/L)空腹血糖(mmol/L))]/22.5,计算体重指数(BMI)。(3)基因组DNA的抽提。(4)PCR扩增:从NCBI的GENEBANK中获得PAI1的DNA全序列(x13323),设计引物:5G等位基因特异性引物(5GF):5-GTC,TGG,ACA,CGT,GGG,GG-3;4G等位基因特异性引物(4GF):5-GTC,TGG,ACA,CGT,GGG,GA-3;对照上游引物(CF):5-AAG,CTT,TTA,CCA,TGG,TAA,CCC,CTG,GT-3;共用下游引物(R):5-TGC,AGC,CAG,CCA,CGT,GAT,TGT,CTA,G-3。待测产物长度:139bp;对照产物长度:257bp。15lPCR反应体系,每管含:DNA模板1.5l,上游引物(3pmol)1.5l,下游引物(3pmol)1.5l,10Buffer(不含Mg++)1.5l,dNTP(2mM)1.5l,Mg++(2.5mM)0.9l,双蒸水6.48l,Taq酶(5U/l)0.12l,总体积15l。PCR反应条件:94预变性5min,(94变性1min,63退火1min,72延伸2min)30个循环后再予725min。(5)琼脂糖凝胶电泳:取琼脂糖2g,加入1TAE100ml,加适量溴化乙锭(EB)染色制备2%琼脂糖胶板,取15lPCR产物上样,接通电源于120mV电泳30min。采用凝胶图像分析系统分析、记录实验结果。(6)DNA序列分析验证:选取有代表性的DNA产物送申能博彩测序公司测序,进行DNA分析验证。1.4统计分析采用SPSS11.0统计软件包处理数据,单因素分析进行2检验或t检验。多因素分析用多元回归分析。P<0.05认为有统计学意义。2结果2.1电泳分析结果PAI1基因三种基因型PCR产物的电泳结果(见图1)。杂合子用两种引物均能扩增出条带,纯合子用两种引物只能扩增出一条条带PAI1基因对照产物PCR产物的电泳结果图1Marker:PUCMix所有样本均进行对照引物扩增,全部得到清晰条带2.2测序结果将3组基因型

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