RS4型抗性淀粉对高脂饮食大鼠肝功能代谢紊乱的影响

作者:赵云龙;苏哲;周中凯 刊名:粮食与油脂 上传者:郭燕

【摘要】通过观察5组(正常组、高脂对照组、普通酯化淀粉组、蜡质酯化淀粉组和高直链酯化淀粉组)雄性Wistar大鼠肝脏HE染色切片并分别测定其血清中谷丙转氨酶(ALT/GPT)、谷草转氨酶(AST/GOT)、碱性磷酸酶(AKP)的活力,考察了在大鼠形成高脂血症过程中RS4型抗性淀粉对肝功能代谢紊乱及肝损伤的修复作用。结果表明,抗性淀粉对高脂饲料致高脂血症大鼠的肝功能代谢紊乱有较好的调节和改善作用,以期为有效改善饮食引起的肝功能紊乱研究提供理论依据。

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欧洲抗性淀粉研究协会(EURESTA)对抗性淀粉(resistant strach,RS)作了明确定义:在健康人体小肠中不能被吸收的淀粉或淀粉降解产物[1]。抗性淀粉的生理功能表现:降低血糖,改善2型糖尿病的血糖[2-3],降血脂和控制体重,增加排便量,抑制癌细胞生长,降低结肠癌发生率[4-6],改善肠道内环境,降低肠道末端疾病。通过检测经灌胃普通酯化淀粉、蜡质酯化淀粉及高直链酯化淀粉3种RS4型抗性淀粉并自由进食高脂饲料的Wistar大鼠的谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)及碱性磷酸酶(AKP)水平,考察RS4抗性淀粉对高脂饮食Wistar大鼠的肝功能失衡的影响,从而为RS4型抗性淀粉应用于功能性食品的开发与研究提供试验依据。1材料与方法1.1材料与试剂谷丙转氨酶(AST/GPT)测试盒、谷草转氨酶(AST/GOT)测试盒、碱性磷酸酶(AKP)测试盒:南京建成生物工程研究所。1.2仪器设备NYW-96M酶标仪:北京诺亚威仪器仪表有限公司;VORTEX-5漩涡混均器:上海书培实验设备有限公司;FM-500荧光倒置显微镜:上海普丹光学仪器有限公司;GH-15 37℃水浴箱(气浴箱):上海平轩科学仪器有限公司;微量移液管:梅特勒-托利多国际有限公司。1.3试验动物雄性Wistar大(健康SPF级):体重(200±10)g,购自人民解放军军事科学医学院实验动物中心,生产许可证编号SCXK-(军)2012-0004。1.4动物分组及饮食健康Wistar雄性SPF级大鼠40只,以基础饲料适应性喂养1周,确定均无异常情况后进行分组试验。随机分为正常组(给予基础饲料)、高脂对照组(给予高脂饲料)、普通酯化淀粉组、蜡质酯化淀粉组和高直链酯化淀粉组,共5个试验组,每组8只,干预组均自由进食高脂饲料,3种酯化淀粉分别灌胃,灌胃量各2g/只·d。大鼠自由采食饮水,每笼饲养4只,明暗交替10 h/14 h,室内温度保持在20~25℃,湿度为40%~60%。1.5采样及测定6周喂养结束后,大鼠禁食不禁水12 h,股动脉取血,在4℃下以3 000 r/min离心10 min分离血清,于-80℃下保存备用。分离的血清用于测定GPT、GOT及AKP水平。取肝脏称重后,取一部分用甲醛固定,用以制备HE染色切片,另外一部分液氮快速冷冻后于-80℃保存备用。1.6试验方法1.6.1酯化度测试酯化淀粉的取代度(DS)以醋化产物中的乙酰基(-COCH3)含量来表示。本试验采用滴定法测定产物中-COCH3含量。取0.5 g酯化淀粉于250 m L锥形瓶中,加入25 m L丙酮、3滴1%酚酞指示剂,混匀,再加入25 m L 0.5 mol/L Na OH标准溶液后摇匀,室温下在磁力搅拌器上皂化60 min,用蒸馏谐水冲洗锥形瓶的塞子及瓶壁,再将已皂化过的含过量碱的溶液用0.5 mol/L HCl标准溶液滴定到红色消失且30 s不变即为反应终点,记录体积V1(m L)。以原淀粉做空白试验,准确称取0.5 g原淀粉,测定步骤与上述相同。记录消耗0.5 mol/L HC1标准溶液的体积为V2(m L)。平行3次,按照公式(1)、(2)计算产物的取代度。W=(1)DS=(2)式中:V1、V2分别为滴定原淀粉和酯化淀粉消耗的HC1的体积,m L;C为HC1溶液的摩尔浓度,mol/L;43为酯基的摩尔质量,g/mol;162为葡萄糖单元的摩尔质量,g/mol;W为乙酰基含量,%;DS为脱水糖环中-OH被-COCH3取代的数目,即取代度。1.6.2肝脏HE染色切片的制备及观察将甲醛固定的肝组织用石

参考文献

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