越鞠丸加味对反流性食管炎大鼠食管黏膜PCNA、p53、CyclinD1表达的影响

作者:郑婷婷;叶蔚;叶斌;刘彬彬 刊名:中国中医药科技 上传者:罗映雪

【摘要】目的:观察越鞠丸加味对反流性食管炎大鼠食管黏膜PCNA、p53和CyclinD1表达的影响。方法:采用“不全幽门结扎+贲门肌切开术”法建立大鼠反流性食管炎模型。50只SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、越鞠丸加味组、奥美拉唑组,每组10只。各药物组连续给药3周后。HE染色观察大鼠食管黏膜病理学改变;免疫组化法检测PCNA、p53、CyclinD1的表达。结果:从大体上和病理上观察模型组大鼠RE评分与正常组组比较有明显差异(P〈0.01);两药物组评分较模型组明显降低(P〈0.01)。模型组大鼠食管黏膜PCNA、p53、CyclinD1表达较正常组、假手术组显著增高(P〈0.01);越鞠丸加味组和奥关拉唑组大鼠食管黏膜PCNA、p53、CyclinD1表达较模型组显著降低(P〈0.01);越鞠丸加味治疗组PCNA、CyclinD1表达低于奥关拉唑组,p53表达两组之间差异无显著性。结论:越鞠丸加味能明显改善反流性食管炎大鼠食管黏膜的病理学改变,减轻食管炎症,降低RE大鼠食管黏膜PCNA、p53、Cy—clinD1的表达可能是其治疗RE的作用机理之一。

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反流性食管炎(reflux esophagitis,RE)指胃内容物或十二指肠液反流进入食管,所含酸性物质破坏食管黏膜而出现的慢性炎症[1]。一般情况食管下端的括约肌张力较高,如果食管括约肌、贲门肌张力减弱,食管内压小于胃内压,就会出现反流[2]。通常以剑突下或胸骨后的灼痛感、反酸、呕吐以及吞咽困难等为临床表现[3]。近年来RE发病率有增加的趋势,在我国RE患者发病有年轻化的趋势[4]。RE有诱发消化道出血或穿孔、食管溃疡狭窄和Barrett食管等并发症的可能[5]。研究发现采用中医药辨证治疗RE疗效显著,特别是在预防复发上优于单纯西医治疗[6]。临床研究发现越鞠丸加味治疗RE已取得良好疗效[7]。目前炎症介质、细胞因子及分子生物学成为RE研究关注的热点。增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)可以明确反映细胞代谢及增殖状态,PCNA的阳性表达在反流性食管炎中有重要作用[8]。p53为抑癌基因,参与DNA损伤修复,在细胞增生、分化、细胞凋亡的诱导及维护细胞基因组完整性的过程中发挥着重要作[9]。细胞周期蛋白Dl(cell cycle proteinDl,Cyclin Dl)是重要细胞周期调节因子之一,参与并促进DNA的复制,促进细胞增殖,在RE中Cyclin Dl的表达呈逐步上升趋势[10]。本研究从PCNA、p53、Cyclin D1在RE中表达入手,探讨越鞠丸加味对RE的疗效及作用机制。1材料1.1动物健康清洁级SD大鼠50只,雌雄各半,体质量(200±20)g,由上海斯莱克实验动物有限公司提供,许可证号:SCXK(沪)2003-0003。1.2药物越鞠丸加味:制香附、川芎、六神曲、焦栀子、苍术、吴茱萸等中药常规水煎浓缩,根据成人量折算48 mg/kg灌胃。奥美拉唑肠溶片(洛赛克):阿斯利康制药有限公司,国药准字:J20080097,20 mg/片。1.3试剂和仪器CHK型光学显微镜及成像系统:日本OLYMPUS,台湾生产;冷冻台:孝感市宏业医用仪器有限公司;HM340E型石蜡切片机:德国MICROM公司;PHY-III型病理组织漂烘处理仪器:常州市郊区中威电子仪器厂;YB-7B型生物组织包埋机:湖北省孝感市亚光医用电子技术有限公司。2方法2.1动物造模、分组及给药50只大鼠,按性别、体质量随机分别为正常组(10只)、假手术组(10只)和造模组(30只)。造模前禁食24 h,禁水2~4 h。用蒸馏水配制10%水合氯醛溶液,腹腔注射(3 m L/kg)进行麻醉。沿腹中线切开进腹,分离食管下段、全胃及幽门,距幽门1 cm处的胃侧壁切开一个小孔,置入1.55 mm金属针通过幽门,结扎幽门环,抽出金属针后缝合胃切开处。纵行切开贲门肌0.5 cm至黏膜层。关腹前,用无菌纱布吸尽腹腔中的液体,腹腔注入1 m L庆大霉素溶液(2万U/m L),造模后禁食24 h,不禁水。造模后1周内每日腹腔注射庆大霉素溶液1 m L。假手术组:开腹后翻动胃2~3次,予无菌纱布将腹腔中液体吸干,腹腔注入1 m L庆大霉素溶液(2万U/m L),关腹。造模后禁食24 h,不禁水。造模后1周内每日腹腔注射庆大霉素溶液1 m L(预防感染。正常组不作处理。造模时间为3周。造模3周后,30只造模大鼠随机分成模型组、越鞠丸加味组、奥美拉唑组,每组10只。越鞠丸加味组按照48 mg/kg灌胃中药复方越鞠丸加味,西药组按照8 mg/kg灌胃奥美拉唑;正常组、假手术组、模型组每日给予等容量生理盐水灌胃,持续3周。末次给药后,禁食不禁水

参考文献

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