薯蓣皂苷元对PC12细胞氧化损伤的保护作用

作者:刘铨;陈健;王美玲 刊名:上海中医药大学学报 上传者:张斌

【摘要】目的:探讨薯蓣皂苷元(diosgenin,DG)对H2O2诱导损伤的PC12细胞的保护作用。方法:用H2O2损伤PC12细胞建立氧化应激损伤细胞模型,在电子显微镜下观察其细胞形态学特征,并通过MTT法检测不同浓度DG对正常PC12细胞和模型细胞增殖的影响;应用流式细胞术检测DG对模型细胞凋亡率和细胞周期的影响。结果:与正常组比较,不同浓度H2O2(100、200、400μmol/L)损伤组PC12细胞生存率均显著下降(P<0.01),DG 3个浓度组(1.25、2.5、5.0μmol/L)PC12细胞生存率均显著提高(P<0.01)。与模型组比较,DG 3个浓度组(1.25、2.5、5.0μmol/L)PC12细胞生存率均显著提高(P<0.01);2.5μmol/L的DG可显著抑制H2O2诱导的PC12细胞凋亡(P<0.01),在细胞周期上表现为G0~G1期细胞减少,同时S期增多。结论:DG能促进PC12细胞增殖,对H2O2氧化损伤的PC12细胞具有保护作用。

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阿尔茨海默病(Alzheimer’sdisease,AD)是一种最常见的以神经退行性病变与渐进性痴呆为特征的老年疾病。随着人口老龄化增加,AD的发病率逐渐增加,如何治疗AD已经成为一个研究热点。关于AD的发病机制目前还不明确,研究表明,氧化应激造成神经元损伤可能导致AD的发生[1]。薯蓣皂苷元(diosgenin,简称DG)是一种重要的甾体皂苷元,广泛存在于薯蓣科植物中,是山药的主要成分之一[2]。现代研究证实DG具有抗肿瘤、抗心血管系统疾病、抗炎等多种药理活性[3-5],但对神经细胞的氧化损伤保护作用报道较少。PC12细胞是一种常见的神经细胞株,细胞形态、结构和功能上具有典型神经元的特征,常用于AD的体外研究[6]。H2O2是一种常用的细胞氧化应激诱导剂,广泛用于诱导细胞氧化应激模型。故本研究以H2O2诱导PC12细胞建立氧化损伤模型,探讨DG对氧化损伤的PC12细胞的保护作用。1材料与方法1.1实验材料1.1.1细胞鼠肾上腺嗜铬细胞瘤单克隆细胞系(PC12细胞系),由广州中医药大学基础医学院提供。1.1.2药品与试剂薯蓣皂苷元标准品,成都贝斯特试剂有限公司;胎牛血清、DMEM培养基、青-链霉素,美国HyClone公司;马血清、0.25%胰蛋白酶,美国Gibco公司;过氧化氢(分析纯),成都市科隆化学品有限公司;二甲基亚砜(DMSO),美国Sigma公司;3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT),美国Amresco公司;FITCAnnexin试剂盒、PI/RNase染色液,美国BD公司;96孔细胞培养板、10cm细胞培养皿、6cm细胞培养皿,美国康宁公司。1.1.3主要仪器BDS200倒置显微镜,重庆奥特光学仪器有限责任公司;BNA-321D细胞培养箱,日本TOABAIESPEC公司;SW-CJ-1F型单人双面净化工作台,苏州苏洁净化设备有限公司;i’Mark680酶标仪,美国BIO-RAD公司;LIBRORAEG-220电子分析天平,日本岛津公司;TDZ5-WS离心机,长沙湘智离心机仪器有限公司;BDFACSCantoII流式细胞仪,美国BD公司。1.2PC12细胞培养PC12细胞培养液含84%DMEM培养基、10%胎牛血清、5%马血清和1%青-链霉素,细胞接种于10cm细胞培养皿,置于37、5%CO2的培养箱内培养,24h更换培养液1次,细胞长至约80%时传代。1.3H2O2诱导的PC12细胞损伤模型的建立取对数生长期PC12细胞,用0.25%胰蛋白酶消化,接种于96孔板,每孔约1104个细胞。设正常组、H2O2损伤组(100、200、400mol/L),共4组,每组3个复孔。孵育24h后,正常组予常规细胞培养液150l,H2O2损伤组加入含以上浓度的H2O2细胞培养液150l,继续培养24h后,在电子显微镜下观察各组细胞形态并照像,再以MTT法检测各组细胞生存率。1.4检测指标和方法1.4.1MTT法检测DG对正常PC12细胞增殖的影响取对数生长期PC12细胞,用0.25%胰蛋白酶消化,接种于96孔板,每孔约1104个细胞。设正常组及DG低、中、高浓度组,共4组,每组3个复孔。孵育24h,正常组予常规细胞培养液150l,DG低、中、高浓度组分别给予DG终浓度为1.25、2.5、5.0mol/L的培养液150l,培养24h后,每孔加入5g/L的MTT溶液20l,继续培养4h后,吸弃上清,每孔加DMSO150l,水平摇床混匀,于酶标仪490nm波长处测定吸光度OD值,以正常组细胞生存率为100%,计算其他组的细胞生存

参考文献

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