EDTA抗原修复液在不同修复方法中的效果比较

作者:成克伦 刊名:中国冶金工业医学杂志 上传者:徐联群

【摘要】目的探讨EDTA抗原修复液在不同修复方法中的修复效果。方法对EDTA抗原修复液采用不同修复时间的高压法对同一组织进行抗原修复,检测10种常用抗体的染色效果并与煮沸法进行比较。结果 EDTA抗原修复液高压法在不同修复时间修复效果存在差异。结论使用EDTA抗原修复液高压法及选择合适的修复时间修复抗原能够达到理想的修复效果,可以代替煮沸法。

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在免疫组织化学染色中,部分抗原的修复要通过EDTA抗原修复液煮沸法进行。笔者采用不同修复时间的高压法通过EDTA抗原修复液对抗原进行修复,并与煮沸法的修复效果进行对比,旨在探讨EDTA抗原修复液合适修复时间的高压法在免疫组化中的应用价值。 1材料与方法1.1标本来源本组标本取自2013年6月至2014年4月贵州航天医院收治的肿瘤患者20例,其中肺癌11例、前列腺癌3例、胃间质瘤2例、淋巴瘤2例、间皮瘤1例、子宫内膜间质肉瘤1例、乳腺癌1例;标本均经10%中性福尔马林固定,常规脱水、石蜡包埋,切片厚为4m,且均经病理证实为抗原表达阳性的肿瘤标本。1.2试剂和仪器(1)试剂:包括TTF-1、CK5/6、P504S、CD117、CD2、Bcl-6、CR、CD10、CD31、CEA共10种常用抗体;EDTA抗原修复液(0.01M,pH9.0);PBS缓冲液(0.01M,PH7.4);即用型快捷免疫组化MaxvisionTM试剂盒。(2)仪器:包括烤箱、电热高压锅、培养箱等。1.3修复方法(1)高压法:取EDTA抗原修复液1500ml放入电热高压锅中加热至沸腾后,将放置在耐高温塑料架上的切片放入EDTA抗原修复液中,拧紧锅盖继续加热至喷气,扣上压力阀,分别于加热2、5、7min后打开排气阀,待EDTA抗原修复液冷却至室温取出切片备用。(2)煮沸法:取EDTA抗原修复液1500ml放入高压锅中加热至沸腾后,将切片放入EDTA抗原修复液中,盖上锅盖(锅盖不拧紧、亦不扣压力阀)继续加热20min,待EDTA抗原修复液冷却至室温取出切片备用。表1EDTA抗原修复液高压法的不同修复时间效果及与煮沸法效果比较抗体种类克隆号组织类型高压法2min5min7min煮沸法20minTTF-18G7G3/1肺癌-/I+/++/+++/CK5/6D5/16B4肺癌+/I++/+++/+++/P504S13H4前列腺癌-/I+/++/+++/CD117YR145胃间质瘤-/I+/++/+++/CD2AB75淋巴瘤-/I+/++/++/Bcl-6SP66淋巴瘤-/I++/+++/+++/CRSP13间皮瘤-/I+/++/+++/CD10MX002子宫内膜间质肉瘤-/I+/++/+++/CD31JC/70A乳腺癌+/I++/+++/+++/CEAZC23肺癌+/I++/+++/+++/1.4免疫组化染色及结果判定免疫组化染色步骤参照试剂盒操作说明进行,用PBS代替一抗作为阴性对照,每种抗体均用即用型抗体浓度进行实验。由2位病理医师采用双盲法对标本染色结果进行评价,标本细胞呈深棕黄色者为强阳性(+++)、呈浅棕黄色为弱阳性(+)、介于二者之间者为阳性(++),无着色者为阴性(-);阳性细胞50%为级、<5%为I级、介于二者之间为级。免疫组化染色结果以“染色强度/阳性细胞级别”的形式表示。2结果在EDTA抗原修复液高压法中,随着高压修复时间的增加,标本细胞染色强度和阳性细胞级别逐渐增加;当高压修复时间超过7min后,其染色效果与煮沸法相当。见表1。3讨论外检标本若采用10%中性福尔马林固定,常可导致组织中蛋白质分子内或分子间形成醛键,使部分蛋白抗原决定簇被隐藏起来,造成某些蛋白表达减弱或不表达、免疫组化染色效果欠佳。抗原修复正是针对这一现象进行的补救措施,其通过物理和(或)化学方法,不同程度地恢复抗原的原有空间结构,使被隐藏的抗原决定簇重新暴露出来,以达到理想的标记染色效果。抗原修复的方法较多,正确选择抗原修复方法是决定染色成败的主要因素之一[1]。现已证实,高压法抗原修复因有封闭稳定的

参考文献

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