Rb在婴幼儿皮肤血管瘤不同时期的表达及意义

作者:于浩;刘树发 刊名:黑龙江医药科学 上传者:邵贞英

【摘要】目的:探讨Rb蛋白在血管瘤发生、发展及退化过程中的表达状况及其意义。方法:采用免疫组织化学方法(SABC法)检测人皮肤血管瘤增生期、退化期及正常皮肤组织中Rb的表达水平,并结合第因子相关抗原的免疫组织化学染色证实表达Rb的细胞是血管内皮细胞。利用计算机图像分析技术测量不同时期血管瘤组织和正常皮肤组织Rb表达的积分光密度和面积。结果:增生期血管瘤内皮细胞Rb表达水平低于退化期,差异有显著性(P<0.05),退化期血管瘤内皮细胞Rb表达水平与正常皮肤组织相比,差异有显著性(P<0.05)。结论:Rb通过抑制血管瘤内皮细胞增殖和血管生成而在血管瘤的退化过程中起重要作用。

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血管瘤是婴幼儿最常见的良性肿瘤,出生时不存在,出生后1个月内出现。其患病率为3%~8%,血管瘤发生的相关因素有:种族性别家族史出生体重产前检查等[1,2]。持续发展的血管瘤可产生溃疡、出血、感染、器官功能损害(视觉及听觉、呼吸和循环系统、骨骼损害及肢体畸形)等一系列并发症,而位于颜面、颅内及口腔的血管瘤可引起明显的畸形及功能障碍,严重影响患者的身心健康[3]。血管瘤是一种以血管内皮细胞异常增殖、大量血管增生为主要病理学特征的良性血管病变,至今对其病因及发病机制仍不十分清楚[4]。细胞周期与肿瘤的关系是近年来生命科学研究中的热门课题之一。细胞周期是细胞生命活动的基本过程,正常情况下,细胞在周期时相的变迁中进入增殖、分化、衰老和死亡等生理状态。如果细胞周期调控异常,细胞将进入病理状态,如细胞转化、癌变。Rb是细胞周期调控系统中的重要因子,是一种抑癌基因,阻断细胞周期从G1到S期的转换,从而抑制细胞增殖,由于目前鲜有关于Rb与人皮肤血管瘤相互关系的文献,为此我们应用免疫组织化学方法检测不同时期人皮肤血管瘤组织中以及正常皮肤组织中Rb蛋白的表达,并结合第因子相关抗原的免疫组织化学染色证实表达Rb的细胞是血管内皮细胞,以探讨Rb在血管瘤发生、发展过程中的作用机制。1材料与方法1.1材料1.1.1材料来源收集佳木斯大学附属口腔医院病理科2001~2007年皮肤血管瘤存档蜡块49例,其中男28例,女21例,最小年龄40d,最大年龄5岁。这些血管瘤所在的部位有头皮、前额、眼睑、耳背、颈部、背部、上臂、大腿、手和足的皮肤等。所有的患者术前均未接受任何可能引起Rb抗原改变的放射治疗、化学治疗及免疫治疗等。1.1.2材料分组蜡块切片厚5m,常规HE染色和免疫组织化学SABC法检测增殖细胞核抗原(PCNA,proliferatingcellnuclearantigen),按Mulliken[5]分类标准并结合PCNA的表达进行分组。增生期血管瘤26例,退化期血管瘤23例,另取瘤组织周围正常皮肤组织5例作对照。1.2主要试剂和仪器浓缩型兔抗人Rb单克隆抗体,即用型兔抗人PCNA单克隆抗体,即用型兔抗人第因子相关抗原单克隆抗体,即用型SABC通用型免疫组织化学试剂盒,DAB显色试剂盒及多聚赖氨酸。以上试剂均购于福州迈新生物技术开发公司。1.3方法常规HE染色:免疫组织化学SABC法检测Rb、PCNA和第因子相关抗原。主要步骤:5m组织切片常规脱蜡至水,Rb和PCNA采用高压抗原修复,第因子相关抗原采用胃酶消化修复抗原,3%过氧化氢处理10min以抑制内源性过氧化物酶活性,正常羊血清处理15min以减少非特异性背景,一抗4孵育过夜,生物素标记的二抗处理15min,链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶复合物处理15min,DAB显色液显色,自来水冲洗终止反应,苏木精复染,脱水,透明,封片。1.4免疫组织化学结果判断采集免疫组织化学染色图像,用Image-ProPlus分析软件进行图像分析,每张切片取5个视野测定Rb、PCNA阳性产物的积分光密度值(IOD值)和面积(AREA),取平均值代表阳性产物表达强度,IOD/AREA值越大表示阳性产物表达越强。1.5统计学方法实验所得数据用表示,用SPSS11.0软件对各组数据进行方差齐性检验,各组数据间的差异进行单因素方差分析。2结果2.1HE染色退化期血管瘤组织中可见内皮细胞减少,血管腔增大,血管间结缔组织增多,内皮细胞核扁平,见图1;增生期血管瘤组织中可见条索状或团块状内皮细胞增生,其间有不规则的内皮间隙和完整的血管腔,内皮细胞核肥大而淡

参考文献

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