冬凤兰非共生萌发和低温离体保存

作者:罗远华;冷青云;莫饶;陈业渊 刊名:安徽农业科学 上传者:李迎光

【摘要】[目的]利用组培技术建立冬凤兰(Cymbidium dayanum)非共生萌发和低温离体保存技术,以达到快速繁殖和长期离体保存该植物的目的。[方法]以冬凤兰种子为外植体,选择不同培养基建立冬凤兰非共生萌发技术;同时利用原球茎为材料,选择低温离体保存,恢复增殖及植株再生条件,初步建立冬凤兰低温离体保存技术体系。[结果]冬凤兰种子在花宝1号,MS培养基上培养90 d萌发率98%以上;原球茎在花宝1号培养基上于5℃、黑暗中能连续保存18个月以上,成活率达90%,并能在1/2 MS、花宝1号培养基中进行恢复增殖;壮苗生根培养基为1/2 MS培养基。[结论]该研究为冬凤兰种质的离体保存和快速繁殖提供了实践基础。

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冬凤兰(Cymbidiumdayanum)是兰属附生兰,叶呈带形,暗绿色,总状花序,其株型优美,是一种非常有开发利用价值的野生兰。由于热带雨林的不断破坏以及人为的乱挖乱采,野生冬凤兰资源损失严重,自然分布急剧减少。因此,采用植物组织培养技术进行冬风兰原球茎低温离体保存,对于其种质资源的保存及开发利用都有重要意义。非共生萌发(无菌萌发)是兰科植物种子萌发的主要方法。低温离体保存是植物种质资源保存最常用的一种方法。Homes等首先报道了兰属(Cymbidium)植物原球茎的低温保存[1]。我国学者报道了铁皮石斛(Dendrobiumcan-didum)[2-5]、金钗石斛(Dendrobiumnobile)[6]、独占春(Cymbidi-umeburneum)[7]等兰科植物的离体保存研究。目前,已在兰属(Cymbidium)、石斛兰属(Dendrobium)、香夹兰属(Vanilla)、苞舌兰属(Spathoglottis)、万代兰属(Vanda)、白及属(Bletilla)等属植物上开展了种质资源的离体保存研究[2]。关于冬凤兰无菌播种及原球茎的低温离体保存研究尚未见报道。为此,笔者以冬凤兰成熟种子无菌萌发得到的原球茎为材料,建立冬凤兰原球茎低温离体保存技术体系,为冬凤兰的种质资源保存提供依据。1材料与方法1.1材料冬凤兰成熟种子。1.2方法1.2.1种子的消毒及无菌接种。将成熟但未开裂的蒴果用自来水冲洗表面后,在超净工作台上用手术刀削除病斑,用75%(V/V,下同)的酒精擦洗表面,然后置入95%的酒精中浸泡数秒后取出,灼烧灭菌,以表面酒精烧干即可(重复2~3次)。切开消毒后的蒴果,将种子均匀播洒在原球茎诱导培养基上培养。1.2.2原球茎的诱导。培养基为MS、花宝1号2种固体培养基。均添加BA0.5mg/L、NAA0.1mg/L、CM(椰子汁)100ml/L、AC(活性炭)2g/L、蔗糖25g/L,此外花宝1号另添加LH(水解乳蛋白)1g/L。pH值为5.4~5.6,培养温度(262),光照时间10~12h/d,光照强度1000~1500lx。以诱导出的原球茎作为低温保存材料。1.2.3原球茎低温保存方法。培养基为MS、花宝1号2种固体培养基,均添加BA0.5mg/L、NAA0.05mg/L、LH0.5g/L、AC2g/L、蔗糖20g/L,pH值为5.4~5.6。将生长一致、无分化的原球茎作为低温保存材料。保存步骤是先把材料接种在以上2种培养基中,先于常规条件(温度(262),光照1500lx)培养12~15d,然后置入121000lx中培养3~5d,最后将两种培养基同时置入5黑暗和5500lx光照中保存。1.2.4恢复增殖及植株再生。材料保存数月后,于常规条件下培养3~5d,然后转接到恢复增殖培养基中培养。培养基为1/2MS、花宝1号2种固体培养基,均附加BA3mg/L、NAA0.5mg/LL、H1g/L、CM100ml/L、AC1g/L、蔗糖25g/L,pH值为5.4~5.6。壮苗生根培养基为1/2MS+LH0.5g/L+CM100ml/L+NAA0.1mg/L+AC2g/L+蔗糖30g/L,pH值为5.4~5.6。以上培养温度均为(262),光照时间12~15h/d,光照强度1500~2000lx。2结果与分析2.1种子萌发冬凤兰成熟但未开裂的蒴果体积较大、果皮厚实,因此可以采用灼烧的方法灭菌。该法不用杀菌剂且操作简便,是冬凤兰种子理想的灭菌方法。成熟的种子具有较高的萌发率,接种后约90d在花宝1号和MS培养基上均能诱导出黄绿或淡绿色原球茎

参考文献

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