罗氏沼虾野田村病毒和双顺反子病毒双重RT-PCR检测方法与序列分析

资源类型: 资源大小: 文档分类:农业科学

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【作者】 潘晓艺  刘杜鹃  沈锦玉  张宇飞  蔺凌云  王军毅  郝贵杰  姚嘉赟  徐洋  袁雪梅 

【关键词】 罗氏沼虾  双顺反子病毒  野田村病毒  双重RT-PCR 

【出版日期】2012-11-15

【摘要】罗氏沼虾野田村病毒(Macrobrachium rosenbergii nodavirus,MrNV)和双顺反子病毒(M.rosenbergii dicistrovirus,MrDV)是已报道对罗氏沼虾易感的主要致病性病毒,该研究通过建立双重RT-PCR方法对MrDV和MrNV两种病毒同时进行检测。根据MrDV和MrNV基因组序列的保守区分别设计特异性引物,并对双重PCR的退火温度和引物浓度进行优化,在获得优化反应体系和反应条件后,对罗氏沼虾样品进行检测。结果表明,双重PCR最佳退火温度为60℃,反应体系最佳引物终浓度MrNV384为0.1μmol/L,MrDV472为0.05μmol/L,对病样总RNA的最低检测限为360fg。引物的特异性检测表明,该检测方法对TSV、WSSV、IHHNV和嗜水气单胞菌TPS-30基因组无交叉反应。对阳性样品的病毒扩增序列分析表明,MrDV RNA依赖性RNA聚合酶编码区序列无变异,MrNV-RNA2序列存在较多变异,进化树结果表明2011年长三角的MrNV病毒主要来自于中国基因型和东南亚基因型。该方法的建立为罗氏沼虾病毒性疾病的预防和种苗的繁育奠定了基础。

【刊名】上海海洋大学学报

参考文献

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