花色苷与茶天然产物协同保护视觉损伤活性研究

资源类型: 资源大小: 文档分类:医药、卫生 上传者:熊文

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【标题】花色苷与茶天然产物协同保护视觉损伤活性研究

【作者】 何敏菲 

【关键词】花色苷 茶天然产物 视紫红质 视网膜神经节细胞 氧化应激 配方 

【出版日期】2014-01-01

【论文级别】硕士

【导师】杜琪珍

【摘要】花青素和茶多酚是植物中的天然抗氧化剂,对自由基有很强的清除能力,对许多疾病,如癌症、肿瘤、心血管疾病、眼部疾病有较好的预防和治疗作用。本论文以矢车菊素-3-0-葡萄糖苷(C3G)、越橘提取物、黑米提取物、桑葚提取物四种花青素和表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)、茶叶提取物、L-茶氨酸、咖啡碱四种茶天然产物作为原料,分别从视紫红质复原率和视网膜神经节细胞活力测试两条思路展开研究,最终根据研究结果设计四种配方,并进一步评估其视力损害保护的生理活性,以确定最佳配方。 通过测定C3G与EGCG协同促进11-顺视黄醛(11-cis-retinal,11-cR)与游离牛蛙视蛋白(Opsin Membranes, OM)体外复原成视紫红质的复原率来评估EGCG与C3G促进视紫红质复原的协同效应。同时,测定含视紫红质的视杆细胞外端片段(retinal rod outer segment, ROS)在一定光照时间下的视紫红质保留率,探讨EGCG与C3G对视紫红质见光分解的影响。实验中的11-cR是通过全反视黄醛(all-trans-retinal, all-tR)光异构反应、高速逆流色谱法分离获得,最终纯度97.5%。实验结果表明,C3G与EGCG的添加,可以显著提高视紫红质复原的速率。当C:E=2:1时,复原率比空白组提高2.4倍。视紫红质分解实验表明11-cR是缓解视紫红质降解的主要因素,C3G与EGCG对视紫红质的降解有一定的保护作用。 不同浓度的C3G、越橘提取物、黑米提取物、桑椹提取物四种花青素和EGCG,L-茶氨酸,茶提取物,咖啡碱四种茶叶天然产物对过氧化氢(H202)和紫外线(UV)诱导的视网膜神经节细胞(RGC-5)氧化应激损伤有显著的保护和修复作用。实验结果表明:C3G、越橘提取物、EGCG、茶叶提取物在中低浓度时均对H2O2与UV引起的损伤有很好的保护作用。L-茶氨酸与咖啡碱对细胞的生长有显著的促进作用,随着其浓度的升高促进作用加强,且两者对受损细胞有很好的保护和修复功能,尤其是L-茶氨酸对于UV引起的细胞损伤有显著的保护与修复作用,最高保护率和修复率在47.1%和35.1%。 最后通过视紫红质复原率、细胞生长增殖率、H2O2损伤保护组细胞存活率、UV损伤保护组细胞存活率、H2O2损伤修复组细胞存活率、UV损伤修复组细胞存活率六个评价指标的测定确定最佳配方为:L-茶氨酸56.6%、咖啡碱19%、EGCG5.4%、越橘提取物19%。

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