ALA-PDT对SZ95细胞内质网应激IRE1α信号通路的影响

资源类型: 资源大小: 文档分类:医药、卫生 上传者:徐增文

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【标题】ALA-PDT对SZ95细胞内质网应激IRE1α信号通路的影响

【作者】 杨桂兰  梁燕华  马燕雪  宋凡君  肖斌 

【出版日期】2018-04-01

【摘要】目的:明确ALA-PDT对SZ95人皮脂腺细胞细胞活力的影响及内质网应激IRE1α信号通路中GRP78、CHOP及Caspase-12表达的影响;方法:1 MTT法分别筛选ALA、红光及ALA-PDT的安全有效浓度及剂量。当SZ95人皮脂腺细胞密度生长至70%左右时,选择生长状态良好的细胞接种于96孔板中。(1)ALA和红光实验均分为空白对照组(仅细胞)和实验组(加入相应浓度的ALA;进行相应剂量的红光辐照),并设调零孔(无细胞,仅加培养基)。ALA实验组分别给予6.25、12.5、25、50、100、200、400、800μg/mL浓度的ALA溶液;红光实验组分别给予1、2.5、5、10、20、40J/cm~2的红光辐照,均辐照20min,对照组和调零孔均仅加培养液。ALA实验各组及调零孔均避光孵育2h后换液;而红光实验各组仅换液,后均继续培养24h。ALA-PDT实验为两组:空白对照组(同上)和ALA-PDT组,并设调零孔(同上)。(2)将ALA-PDT组先用相应浓度的ALA避光孵育2h,后分别给予相应剂量的红光辐照20min,对照组和调零孔无特殊处理。辐照后加入培养液继续培养24h。以上各实验组均用MTT法筛选安全有效的ALA浓度及红光剂量。2.TG加入细胞皿中,24h后提取RNA及蛋白,分别用qRT-PCR和WB法检测GRP78和CHOPmRNA及蛋白的表达以验证内质网应激,GRP78和CHOPmRNA及蛋白表达升高提示细胞发生ERS。2.ALA-PDT对TG诱导ERS的SZ95细胞GRP78、CHOP和Caspase12表达的影响。实验分为TG组(仅加TG)、红光组、ALA组和ALA-PDT实验组。各组均先加入0.5μg/mL的TG孵育24h后,用ALA-PDT法作用于细胞(注意整个过程均避光)。继续培养24h,收集细胞。采用qRT-PCR及WB分别检测GRP78、CHOP和Caspase-12 mRNA和蛋白表达。结果:经筛选,0.5μg/mLTG为诱导SZ95细胞的有效浓度,2μg/mLALA+5 J/cm~2为作用于SZ95细胞安全有效的ALA浓度和红光照射剂量。2.用ALA 2.0μg/mL+5J/cm~2结合的ALA-PDT,作用于TG诱导内质网应激的细胞时,IRE1α信号通路中的标记分子GRP78、CHOP和Caspase-12mRNA和蛋白的表达均明显下调(P<0.05)。结论:1.单独ALA或红光作用于SZ95人皮脂腺细胞,对细胞存活率无明显影响;2.0.5μg/mLTG时可成功诱导ERS,但对细胞存活率无明显影响;2.0μg/mL浓度ALA和5J/cm2剂量红光为作用于SZ95细胞的安全有效ALA-PDT组合;3.2.0μg/mLALA+5 J/cm2红光组成的ALA-PDT对TG诱导ERS的SZ95人皮脂腺细胞的存活有显著保护作用,其机制可能与抑制ERS通路中相关信号分子GRP78/Bip、CHOP和Caspase12的表达有关。

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