非小细胞肺癌KAI1基因和TIMP-1、MMP-9表达与临床生物学行为的关系研究

作者:朱波;赵惠柳;王英;劳明;黄昭东;刘志民;谢娟;欧超 刊名:检验医学 上传者:王灿

【摘要】目的探讨KAI1基因和基质金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达,分析其与临床生物学行为的关系。方法应用免疫组化法检测73例NSCLC、51例相应的癌旁组织和13例非肿瘤性肺组织的KAI1和TIMP-1、MMP-9的表达,采用χ2检验和Pearson法分析三者与临床生物学行为的相关性。结果在73例NSCLC和64例癌旁及非肿瘤组织中,KAI1和TIMP-1的阳性率分别为39.7%、74.0%和90.6%、37.5%,两者比较差异有统计学意义(P<0.05),而MMP-9阳性率为79.4%和67.1%,两者比较差异无统计学意义(P>0.05)。在NSCLC组织中,KAI1检出率在不同TNM分期、淋巴结有无转移、不同肿瘤类型中差异有统计学意义(P<0.05),TIMP-1、MMP-9的检出率在不同TNM分期、淋巴结有无转移中差异有统计学意义(P<0.05),三者检出率与年龄、性别无关;KAI1的表达与TIMP-1、MMP-9呈负相关(r=-0.463 7、-0.344 5,P<0.05)。结论 KAI1和TIMP-1、MMP-9均与肺癌的发展、转移有关,联合检测三者可成为评价NSCLC发生、发展的预后参考指标。

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肺癌是当今世界上对人类健康和生命威胁最大的恶性肿瘤之一。侵袭转移是肺癌患者死亡的首要原因,是1个极其复杂的多基因调控和多步骤发展的过程,并涉及复杂的基因家族群参与的肿瘤转移相关基因的改变,相关基因起抑制肺癌转移或促进转移的作用[1]。KAI1基因是肿瘤转移抑制基因[2],主要影响细胞间及细胞与细胞外基质间的信号传导。基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinase,MMP)及其抑制剂(tissueinhibi-torofmetalloproteinase,TIMP)在肿瘤的侵袭转移过程中发挥了重要作用,是目前研究的热点。我们采用SuperPicTure免疫组化法检测KAI1和TIMP-1、MMP-9在非小细胞肺癌(non-smallcelllungcancer,NSCLC)中的表达,以探讨它们对NSCLC生物学行为的影响,并分析临床病理因素与它们之间的相关性及临床意义。材料和方法一、临床资料收集2007年8月至2009年6月广西医科大学附属肿瘤医院胸外科手术切除肺癌标本73例(经病理学检查确诊为原发性NSCLC)、相应的癌旁组织[距癌组织>3cm,经苏木精-伊红(hematoxylineosin,HE)染色证实无癌细胞浸润]51例和非肿瘤性肺组织标本13例(肺结核5例、支气管扩张4例、炎性假瘤4例)。患者年龄19~78岁,中位年龄56.5岁。腺癌32例(高分化19例、低分化13例),鳞癌41例(高分化19例、中分化16例、低分化6例),依据1997年国际抗癌联盟TNM分期标准,期41例、期19例、期13例。所有患者术前均末接受化疗、放疗及其他抗癌治疗。KAI1抗体购自美国SantaCruz公司,TIMP-1和MMP-9单克隆抗体购自美国Lab-Vision-NeoMarkers公司,二抗SuperPicTure试剂盒、二氨基联苯胺显色剂均为美国Zymed公司产品。二、方法所有手术标本用10%中性甲醛溶液固定,石蜡包埋,制成厚4m的切片,采用免疫组化Su-perPicTure法进行KAI1和TIMP-1、MMP-9染色。按SuperPicTure试剂盒操作说明进行,主要步骤如下:切片脱蜡至水,高压修复1.5min,阻断内源性过氧化物酶20min,正常非免疫血清封闭30min,滴加抗在室温孵育1h,滴加50L酶标抗鼠/兔聚合物,室温孵育30min;新鲜二氨基联苯胺-H2O2溶液显色,苏木精复染。用已知阳性反应片作阳性对照,阴性对照采用磷酸盐缓冲液(phosphatebufferedsolution,PBS)替代抗进行同步染色。KAI1和TIMP-1、MMP-9工作液浓度分别为1150、150、1100。三、结果判断免疫组织化学结果显示肺癌细胞中KAI1蛋白的阳性着色主要表现为细胞浆和/或细胞膜阳性,呈弥漫性分布,TIMP-1蛋白的阳性着色为细胞浆和胞膜内阳性,MMP-9蛋白的阳性着色为细胞膜阳性。染色结果观察采用双盲法,由2位病理科医生在不知病理分级与临床资料的情况下读片,每张切片观察5个视野(400倍)计算阳性细胞数,计算总细胞数不少于1000个,按阳性细胞所占百分数分为:阳性细胞率<5%为阴性(-);5%~24%为弱阳性(+);25%~50%为阳性(++);>50%为强阳性(+++)。四、统计学方法采用SPSS16.0软件进行2检验,相关分析采用Pearson法,P<0.05为差异有统计学意义。结果一、随访所有病例术后进行常规放疗和/或化疗,并追踪随访1年。每月采用电话或信访,术后每隔3个月复查计算机断层扫描,了解有无复发。73例患

参考文献

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