巢湖麻鸭MSTN基因单核苷酸多态性与体重和屠体性状的关联分析

作者:燕翔;陈兴勇;耿照玉 刊名:安徽农业大学学报 上传者:王静

【摘要】应用聚合酶链式反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)的方法,检测巢湖麻鸭公母群体共144只个体MSTN基因外显子3和内含子2的SNPs位点,分析SNPs与8周龄体重、12周龄体重和屠宰性能(胸肌率、腿肌率)的关联性。结果表明,在外显子3(6375 bp)检测到G/A突变,形成3种基因型,分别为AA、AB和BB型,公鸭群体中AA型胸肌率显著高于BB型(P<0.05);母鸭中AB型胸肌率显著高于AA型和BB型(P<0.05),AA型腿肌率显著高于BB型(P<0.05);各基因型间体重差异不显著(P>0.05)。内含子2(5264 bp)检测到T/C突变,产生的3种基因型分别为DD、DE和EE型,各基因型间体重和屠宰性能差异均不显著(P>0.05);合并基因型结果显示,ABDD型母鸭胸肌率显著高于AADD型(P<0.05)并且极显著高于AAEE型和BBDD型(P<0.01),ABDD型母鸭腿肌率显著高于BBDD型母鸭(P<0.05);公鸭在各周龄体重上均显著或极显著高于母鸭,但在屠宰性能上普遍显著低于母鸭。综合以上研究结果,巢湖麻鸭公鸭早期生长速度快于母鸭,母鸭ABDD基因型表现出较高的屠宰性能。

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肌肉生长抑制素(Myostatin,MSTN)又称生长分化因子8(GDF-8),是转化生长因子(TGF-)超家族的一员[1]。研究表明,MSTN是肌肉生长的负调控因子,通过抑制成肌细胞的增殖而发挥作用[2]。对牛[3]、猪[4-5]、鸡[6-10]的诸多研究表明,MSTN基因是影响肉用性状的重要候选基因之一[3-10]。卢俊清等[11]对6周龄北京鸭MSTN基因5,调控区的多态性研究发现Z2系和Z4系北京鸭AA型腹脂重(P<0.05)和胸肌重(P<0.10)都显著高于AB型。岳志刚[12]对绿头野鸭MSTN基因5,调控区、外显子3和内含子2进行的SNP检测发现外显子3的两处SNP位点对绿头野鸭的出栏重、半净膛重、全净膛重、腿肌重和腿肌率有显著影响,而5,调控区和内含子2的SNP位点未对所测生产性状产生显著影响;易恒杰等[13]采用PCR产物直接测序的方法对三穗鸭MSTN基因外显子的SNP检测也发现突变位点对三穗鸭屠体性状具有重要影响。巢湖麻鸭属优质中型肉蛋兼用型鸭种,具有适应性强、肉嫩味美、脂肪适中等特点。但巢湖麻鸭早期生长速度慢,推迟了该品种的出栏时间。为此,本试验利用最小二乘法分析MSTN基因多态性与巢湖麻鸭体重和屠宰性能的关系,从而揭示MSTN基因多态性对巢湖麻鸭生长性能的影响。本研究结果将有助于开发分子标记用于巢湖麻鸭生长性状的辅助选育。1材料与方法1.1供试材料试验用巢湖麻鸭144只,公母各半,饲养于安徽太阳禽业有限公司。分别于初生、4周龄、8周龄、12周龄空腹12h后称重。12周龄时屠宰并测各屠宰性能,血样ACD抗凝,编号离心弃上清液后的细胞用于DNA的制备。1.2基因组DNA的制备基因组DNA的提取采用北京全式金生物技术有限公司的DNA提取试剂盒(EasyPureTMBloodGenomicDNAKit)完成,操作步骤完全按照试剂盒操作方法进行,琼脂糖凝胶电泳检测提取效果并于-20保存。1.3PCR扩增及多态检测实验所用引物根据鸭MSTN基因的DNA序列(GenBankNW_004676457),Primer5.0软件设计,上海生工生物工程技术服务有限公司合成。引物序列、PCR产物大小及所在位置见表1。引物W3的PCR扩增条件为:95预变性5min;95变性30s,60退火30s,72延伸35s,共35个循环;72延伸10min;4保存。引物N2的PCR条件为:95预变性5min;95变性30s,58.5退火30s,72延伸35s,35个循环;72延伸10min;4保存。扩增产物进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳,记录具有多态性的各基因型个体和数量。在合并基因型中,选择样本量大于5的基因型进行比较分析。1.4克隆测序经SSCP分型后,各纯合基因型个体PCR产物纯化回收,连接到pMD19-T载体上,转化至DH5大肠杆菌,经DNA抽提、酶切、电泳鉴定正确的克隆送北京华大基因有限公司测序。表1PCR扩增所用的引物序列、产物大小及位置Table1PrimersequencescorrespondingtoPCRproductsizesandpositions引物名称Primer引物序列(53)Sequence引物位置/bpLocation片段大小/bpFragmentlengthW3上游F:ACCCGCACACTCATCTTGTA外显子3Exon3160下游R:CAGCCGCAACGATCTACAACN2上游F:GGGGAACTATTTCAAACTC内含子2Intron2334下游R:AAAGACTCCTCCTCCAGAC1.5数据统计分析统计各

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