基质金属蛋白酶组织抑制因子-1在2型糖尿病患者中的表达变化

作者:赵春楠;彭群新;李艳萌;王琳;祁松楠;顾国浩;史进方 刊名:广东医学 上传者:邢善芳

【摘要】目的探讨未发生并发症的2型糖尿病患者基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)的变化及其与空腹血糖的关系。方法选取无并发症的2型糖尿病患者41例,门诊体检正常者30例为对照。采用实时荧光定量RT-PCR的方法检测外周血单个核细胞中TIMP-1 mRNA的量,采用ELISA的方法检测血浆中TIMP-1的量。结果 (1)2型糖尿病患者外周血单个核细胞中TIMP-1 mRNA的表达量[(6.13±1.59)copies/mL]明显高于正常者[(5.29±1.56)copies/mL]。(2)2型糖尿病患者血浆中TIMP-1蛋白的表达量[(246 334.83±82 567.858)pg/mL]明显高于正常者[(105 498.00±21 554.324)pg/mL]。(3)2型糖尿病患者血浆中TIMP-1与空腹血糖呈负相关(r=-0.490 1,P<0.01)。结论无并发症的2型糖尿病患者TIMP-1无论是mRNA的表达量还是蛋白的表达量均较正常者偏高,并且血浆中蛋白的表达量与空腹血糖负相关。

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糖尿病(diabetesmellitus)是一种以血糖代谢紊乱为特点的常见慢性疾病,是多基因遗传加多环境因素影响的代谢紊乱综合征。大量研究表明,基质金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP)的含量变化在许多细胞外基质(ECM)聚集的疾病中发挥重要作用,并引起相应疾病的发生[1-2]。目前国内针对糖尿病与基质金属蛋白酶(MMP)系统的研究大多集中在这些分子与糖尿病的某些并发症的关系研究,而针对未出现并发症的糖尿病患者与TIMP-1的关系鲜有报道,因此我们对无并发症的2型糖尿病患者进行外周血单个核细胞中TIMP-1mRNA及血浆中TIMP-1蛋白含量的测定,以探讨其在无并发症的2型糖尿病患者发生发展中的作用和意义,为糖尿病并发症的发生提供预警作用,从而采取一定的干预措施。1资料与方法1.1一般资料所有入选对象均为2012年6月至2013年2月收住本院内分泌科,根据1999年WHO的糖尿病诊断标准,均除外各种急慢性感染性疾病、糖尿病酮症、肝脏疾患、肺间质纤维化、胶原性疾病、心脏疾病、肿瘤及自身免疫性疾病等的2型糖尿病患者41例,选取我院同期健康体检正常者30例,无糖尿病,心脑血管病、肝病、肾病等疾患,无高血压及糖尿病家族史。两组一般资料差异无统计学意义(P>0.05),见表1。1.2主要试剂及仪器1.2.1主要试剂Trizol(购于Invitrogen公司),M-MLVFristStrandKit(购于天根生化科技有限公司),TIMP-1ELISA试剂盒(购于上海吉泰生物科技有限公司)。表1两组一般临床资料的比较x珋s项目2型糖尿病患者正常者2(t)值P值性别(例)2.518>0.05男2814女1316年龄(岁)65.4414.8764.3513.431.348>0.05总胆固醇(mmol/L)4.381.064.170.520.95>0.05三酰甘油(mmol/L)1.671.101.270.591.733>0.05高密度脂蛋白(mmol/L)1.130.241.250.22-1.83>0.05低密度脂蛋白(mmol/L)2.720.702.420.451.95>0.05肌酐(mol/L)63.5217.5363.1719.380.70>0.05尿酸(mol/L)281.76106.86297.0777.35-0.61>0.051.2.2仪器GeneAmpPCRSystem9700扩增仪(美国ABI公司),lightCycler480PCR扩增仪(RocheDi-agnostics公司),ThermoSpectronic紫外分光光度计(美国Spectronic),eppendorf-centrifuge5430台式高速离心机(德eppendorf公司),eppendorf-cen-trifuge5430R低温高速离心机(德国eppendof公司),-80低温冰箱。1.3实验方法1.3.1单个核细胞分离及全血RNA提取取患者和正常者外周血5mL,EDTA-Na2抗凝,按Ficoll淋巴细胞分离液说明书操作分离单个核细胞,按TRIzol法操作步骤提取总RNA,试验于2h内完成。1.3.2逆转录反应及标准品制备按逆转录试剂盒说明书操作将总RNA逆转录为cDNA,用GeneAmpPCRSystem9700扩增仪进行。cDNA-80保存备用。采用本实验室自备的-actin质粒内参品,其浓度由低到高分别为33400、334000、3340000、33400000、334000000copies/mL。1.3.3引物与探针设计及合成引物与探针由上海闪晶生物技术研究所设计

参考文献

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