黄芪对糖尿病大鼠肾组织的保护作用

作者:杨红霞;朱敏怡 刊名:实用医学杂志 上传者:颜涌泉

【摘要】目的:探讨黄芪对糖尿病(DM)肾损害的保护作用机制。方法:建立2型DM模型,黄芪组给予5mL/(只·d)灌胃。12周测体重、血糖、微量白蛋白排泄率(UAE)、尿肌酐(Cr),处死大鼠,用PAS及Masson染色观察肾脏病理变化。用免疫组化方法检测肾组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)和Smad7的蛋白质表达。结果:与对照组相比,DM组大鼠血糖、UAE及肾重/体重比值、Ccr比值均显著上升(P<0.05/0.01),肾小球系膜及基底膜相对面积、肾间质纤维组织相对面积均显著增大(P<0.01),肾组织TGF-β1和Smad7的蛋白质表达均显著上调(P<0.05/0.01))。黄芪注射液治疗组,上述上调指标除血糖外都被显著抑制(P<0.05/0.01)。结论:黄芪注射液对2型DM大鼠肾组织有保护作用,其疗效可能与下调肾组织TGF-β1表达相关,使TGF-β1诱导的内源性Smad7产生减少,从而发挥抗纤维化作用。

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中药黄芪具有益气养气,扶正祛邪,保护肾功能的作用,但关于其作用机制研究甚少。本实验旨在探讨黄芪对DM大鼠肾组织生长转化因子-1(TGF-1)和Smad7的表达的影响,了解其治疗机制。1材料与方法1.1动物模型的建立与分组36只清洁级Wistar雄性大鼠(华中科技大学同济医学院动物中心提供),68周,体重180200g。随机分为两组(1)正常对照组(n=12)喂以常规饲料。(2)模型组(n=24),喂4周高糖高脂饲料(常规饲料加20%蔗糖,10%猪油,25%胆固醇),然后在大鼠左下腹单次注射小剂量链脲佐菌素(30mg/kg体重)。喂养第5周测非禁食血糖、胰岛素、胰岛素抑制试验。以非空腹血糖16mmol/L胰岛素敏感性降低两条件作为2型DM大鼠模型成功标准。成功者入选试验随机分为DM组(n=12),仅予生理盐水灌胃;黄芪治疗组(n=12),给予黄芪注射液(成都地奥九泓制药厂)每只5mL/d灌胃。1.2标本收集模型造成后12周,动物处死前24h置代谢笼、禁食,收集24h尿,用于检测微量白蛋白排泄率(UAE)、尿肌酐(Cr)。动物处死前心脏取血,检测血糖、血胰岛素。行原位灌流去除余血细胞后取肾脏,去除包膜称重,于10%中性甲醛固定作病理,免疫组化。1.3生化指标检查血糖用美国强生血糖仪和试纸直接读取。血胰岛素用SN-582型放免计数器检测。UAE试剂盒为福州太阳公司提供。1.4病理检测常规制备光镜切片,作HE、PAS、PASM和Masson染色。应用HPIAS2000高清晰度医学彩色图像分析系统,测定肾小球系膜及基底膜相对面积(肾小球内PAS阳性染色面积/肾小球毛细血管袢总面积100%),肾间质纤维组织相对面积(肾间质Masson绿染区面积/视野总面积100%)。1.5免疫组化石蜡切片用生物素-酶标链霉亲和素(SP法,福州Maixin-Bio公司),分别测定TGF-1和Smad7的定位和表达。抗TGF-1抗体购自武汉博士德生物公司,多克隆兔抗鼠Smad7购自SantaCruz公司。结果采用HPIAS-2000型医学图像分析系统进行阳性表达的相对比值。1.6统计学计量以xs表示,应用SPSS11.0统计软件进行组间分析,P<0.05差异有统计学意义。2结果2.1生化指标分析见表1。与对照组比较,DM组血糖,UAE及肾重/体重比值、Ccr均显著增高,与DM组比较,黄芪组大鼠的UAE、肾重/体重比值、Ccr显著降低。2.2肾组织病理检查结果见表2。与对照组比较,DM组肾小球系膜及基底膜相对面积、肾间质纤维组织相对面积均增大。与DM组比较,黄芪组两项指标均缩小。2.3肾组织TGF-1和Smad7表达的变化见表3。TGF-1和Smad7主要表达于肾小管上皮细胞,少量表达于肾小球系膜细胞和足细胞。与对照组比较,DM组TGF-1和Smad7蛋白质表达明显上调。与DM组比较,黄芪组的表达明显下调。表1各组大鼠各指标比较xs组别对照组DM组黄芪组鼠数121212血糖(mmol/L)04.880.32020.63.0518.114.71尿UAG(g/min)0.320.081.080.190.830.23肾重/体重(%)0.280.040.750.950.610.09Ccr(mL100g/min)0.670.113.050.391.620.19注:与DM组比较P<0.05,P<0.01表2各组大鼠肾组织病理改变的半定量检查xs组别对照组DM组黄芪组鼠数121212肾小球系膜及基底膜相对面积(%)15.822.5124.395.3219.220.79肾间质纤维组织相对面积(%

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