一种新型小动物脾虚高脂血症模型的建立

作者:李静;贾连群;李宁;朱美林;王俊岩;杨关林 刊名:时珍国医国药 上传者:任明霞

【摘要】目的探索脾虚高脂血症实验动物模型的构建方法。方法 60只SPF级SD大鼠随机分为空白对照组、高脂血症组、脾虚高脂血症组。空白对照组予普通颗粒饲料喂饲,高脂血症组予高脂饲料喂饲,脾虚高脂血症组采用饥饱失常加运动控制及结合高脂饲料喂饲造模。4周后采用一般体征评分标准对大鼠进行评价,间苯三酚法测定尿D-木糖排泄率,全自动生化分析仪检测血清胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、血清淀粉酶(AMY)水平,HE染色观察肝脏形态变化,油红O染色观察肝脏脂质沉积,电镜观察大鼠肝脏超微结构变化。结果与空白对照组相比,高脂血症组及脾虚高脂血症组在一般状态、毛发体表、肛周和总分均得分较高(均P<0.01);血清TC、LDL-C水平显著升高(均P<0.01),HDL-C水平显著降低(P<0.05);肝细胞形成大量脂质沉积,核周间隙增大,胞质内线粒体嵴减少,粗面内质网明显扩张。与高脂血症组相比,脾虚高脂血症大鼠在肛周和总分方面均明显升高(均P<0.01);血清AMY和尿D-木糖排泄率显著降低(均P<0.01)。结论饥饱失常加运动控制及结合高脂饲料喂饲造模,可以构建大鼠脾虚高脂血症动物模型。

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随着人类生活水平的提高和生活方式的改变,高脂血症的发病率逐年攀升,严重影响人类的生活质量。同时高脂血症还是诱发动脉粥样硬化、脂肪肝、糖尿病、肥胖症等的重要因素,积极治疗高脂血症对于降低心脑血管病的发生率和病死率具有重要意义[1]。中医药在防治高脂血症方面具有明显特色和优势,临床治疗中将其归属于“痰浊”范畴,认为脾失健运而生痰浊,痰以致瘀,痰瘀互结为高脂血症的主要病机。有研究表明[2]高脂血症中医临床证型分布尤以脾虚运化无力而致痰浊内停的脾虚痰浊证为多见。中医以辨证论治为主要特色,构建中医证候模型有助于阐明中医基础理论,是现代中医药现代化研究、中医理论创新的关键手段。以往中医脾虚证候动物模型制备,常综合膏粱厚味、劳倦过度、苦寒泻下、饥饱失常等方法。本研究在以往动物模型建立的基础上,旨在探索一种方法上能够体现脾虚痰浊型高脂血症现代致病因素,结果上能够体现脾虚痰浊型高脂血症病理变化的动物模型。1材料与仪器1.1动物雄性SD大鼠,SPF级,体重(30010)g,购自北京维通利华实验动物技术有限公司,合格证号SCXK(京)2012-0001。动物购进后,饲养环境温度为(251),自然光照,喂以正常饲料自由饮食,适应环境7d,进入实验过程。1.2主要试剂TG、TC、HDL-C、LDL-C、血清淀粉酶(SerumAmylase,AMY)测定试剂盒(批号:0113011),均购自四川迈新生物技术有限公司。油红O购自美国Sigma公司。D-木糖试剂盒(批号:20130628),购自南京建成生物工程研究所。1.3主要仪器荧光显微镜(Leica);全自动生化分析仪(日本东芝)。2方法2.1实验动物分组及标本采集SPF级SD大鼠60只,随机分为空白对照组、高脂血症组、脾虚高脂血症组。空白对照组予普通颗粒大鼠饲料喂饲,高脂血症组予高脂饲料喂饲,高脂饲料配方:6%蔗糖,1%谷氨酸钠,5%蛋黄粉,8%花生油,1.5%胆固醇,0.4%甲基硫氧嘧啶,78.1%基础饲料。脾虚高脂血症组采用饥饱失常加运动控制及结合高脂饲料喂饲造模,单日饲喂上述高脂饲料不限量,予精炼猪油灌胃,每次3ml,每日两次,双日喂食干燥甘蓝压制的蔬菜饼不限量,大鼠单笼小笼饲养减少活动,持续4周,同时用脾虚和高脂血症模型评估标准进行评价。2.2一般体征评分根据表1中各项,对于实验动物逐一评分。评分采用随机盲评法,实验人员由A、B、C三个小组组成。A小组成员由本实验的人员组成,负责捉取实验鼠,具体操作为抛硬币决定实验鼠所属组别,并按照实验鼠编号由小至大逐一捉入小笼,交给未看到此过程的B小组成员并记录组别、实验鼠编号和顺序号。B小组成员由不清楚本实验内容的人员构成,负责将实验鼠呈现给C小组成员并报告顺序号。C小组成员由不清楚本实验内容,但有一定的动物实验经验的人员组成,负责按照下述评分表逐一进行打分,并按顺序号记录。评分全部结束后,由本实验小组成员按照A小组成员的记录统计各组评分。2.3D-木糖排泄率大鼠禁食不禁水12h,3%D-木糖溶液每只4ml灌胃,置于代谢笼中,禁食不禁水,收集5h尿液,称量总尿量,并每例取0.5ml尿液样本,对溴苯胺法测量尿液中D-木糖含量,并计算D-木糖排泄率。2.4血脂检测实验前一晚禁食不禁水,称体重,10%水合氯醛麻醉,腹主动脉取血,装入抗凝试管中,室温静置30min,2000r/min离心20min,取血清分装,-20保存,待测。取大鼠肝组织,切成小块,分别4%多聚甲醛固定及冷冻。全自动血液分析仪测定TG、TC、LDL-C、HDL-C、AMY。表1动物一般体征评分表项目0分1分2分一般

参考文献

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