正交设计法优化淫羊藿多糖的提取工艺

作者:于红梅;陈芬芳;王瑞;苏建青;褚秀玲 刊名:动物医学进展 上传者:周蕾

【摘要】为了优选淫羊藿多糖的最佳提取工艺条件,通过单因素试验和正交试验,以料水比、提取时间、提取温度和提取次数为考察目标,以多糖提取率为评价指标,优选最佳提取工艺。结果表明,淫羊藿多糖最佳提取工艺为料水比为1∶25,提取时间2h,提取次数为3次,提取温度为90℃。多糖醇沉浓度为700mL/L。该工艺为淫羊藿多糖的提取奠定了基础,并为进一步的工业化生产提供了科学依据。

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随着我国经济水平的提高,消费者更加关注畜产品的安全[1]。抗生素的残留和细菌的耐药已经成为危害畜产品安全和消费者健康的重要原因[2-3]。国家为了进一步规范抗生素的使用,出台了《兽用处方药和非处方药管理办法》。中药是我国的传统药材,具有绿色、无污染,不产生耐药性和毒性低等优点,是替代抗生素的重要途径[4]。但是传统的中药散剂、汤剂,不仅临床使用不便,还由于生物利用率低,浪费大,造成中兽药发展缓慢,药效差的结果。中药提取物是将中药中的有效成分通过现代的提取、分离技术,提出出来,不仅提高了药材的利用率,也由于成分简单,更便于制定质量标准和检测标准,是中兽药现代化的重要途径之一[5]。淫羊藿(Epimediumbrevicornu)为传统中药,为小檗科(Berberidaceae)淫羊藿属(Epimedium)多年生草本植物。其主要活性成分为淫羊藿黄酮、淫羊藿多糖和淫羊藿苷等[6-8]。研究证实淫羊藿多糖具有促进免疫器官、性腺发育,抗氧化和免疫调节等作用[9-11]。本研究拟对淫羊藿多糖(EPS)提取工艺进行研究,旨在为畜牧业生产中有效利用淫羊藿提科学依据。1材料与方法1.1材料1.1.1药材淫羊藿饮片,购自聊城利民大药店。1.1.2主要试剂浓硫酸、950mL/L乙醇、苯酚和葡萄糖为莱阳经济技术开发区精细化工厂产品。试剂均为分析纯。1.1.3仪器设备HH-8恒温水浴锅,金坛市新航仪器厂产品;FW-200高速万能粉碎机,南京九州干燥设备厂产品;UV-1800分光光度计,上海美谱达仪器有限公司产品;SHB-IV双A循环水式多用真空泵,郑州长城科工贸有限公司产品;RE52CS旋转蒸发仪、B-220恒温水浴锅,上海亚荣生化仪器厂产品。1.2方法1.2.1淫羊藿多糖测定方法的建立淫羊藿多糖的测定方法采用苯酚-硫酸法,具体步骤见参考文献[12],简述如下:将1.9g烘干的分析纯葡萄糖溶于1L重蒸水,制成1.9mg/mL的标准溶液。然后取标准溶液1、2、3、4、5、6、7、8mL分别稀释到100mL,制成浓度为19、38、57、76、95、114、133、152g/mL的溶液,取各溶液0.6mL置于干燥的洁净试管中,加入50mg/mL的苯酚溶液1.2mL,混合均匀,迅速加入5.0mL浓硫酸,混匀,60水浴加热30min,于波长490nm测定吸光度,重蒸水作为空白管对照。以糖浓度为横坐标,吸光度值为纵坐标得标准曲线。1.2.2淫羊藿多糖的单因素提取试验将购买来的淫羊藿饮片60烘干,然后用高速万能粉碎机粉碎,过40目筛,制成淫羊藿干粉备用。采用热水浸提法对淫羊藿多糖进行提取,根据建立的苯酚-硫酸法测多糖的含量,分别考察料水比、提取温度、提取时间和提取次数4个因素对多糖提取率的影响,考察任意一个因素对淫羊藿多糖的提取率影响时,固定其他3个因素水平,具体操作如下:称取1.0g淫羊藿粉末放入试管中,按料水比加入蒸馏水,浸泡30min后,在适当的提取温度下按规定的提取时间提取,并按要求的提取次数分别提取,最后将不同提取次数的药液合并,测定淫羊藿多糖的提取率。1.2.2.1料水比对淫羊藿多糖提取率的影响料水比采用110、115、120、125、130共5个因素,提取温度采用90,提取时间采用1.5h,提取次数采用3次,提取后将3次的提取液合并,采用苯酚-硫酸法测定OD值,根据标准曲线换算出多糖的含量,计算出淫羊藿多糖的提取率,比较不同料液比对淫羊藿多糖得率的影响。1.2.2.2提取温度对淫羊藿多糖提取率的影响提取温度采用60、70、80、90、100共5个因素,料水比采用115,

参考文献

引证文献

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