正交试验法优化畲药山里黄根多糖的提取工艺

作者:何嘉娜;黄真;汪小玉;王喜周 刊名:中华中医药学刊 上传者:仝德

【摘要】目的:优选山里黄根多糖的提取工艺。方法:设计单因素试验和正交试验,以多糖含量为指标,采用苯酚-硫酸法,比较影响多糖含量主要因素的主次关系,优化提取条件,确定最佳提取工艺。结果:影响山里黄根多糖提取率的主次因素为:料液比>提取次数>提取温度>提取时间;山里黄根多糖的最佳提取工艺条件为:提取温度100℃、提取时间100 min、料液比1∶10(g/m L)、提取次数3次,在此条件下,多糖提取率可达72.49 mg/g。结论:优选的山里黄根多糖提取工艺提取率较高,且方法稳定可行。

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山里黄根即栀子花根,为浙江丽水地区常用畲药,具有清热、凉血、解毒等功效,常用于治疗感冒高热、黄疸型肝炎、急性传染性肝炎、吐血、鼻衄、淋病、肾炎水肿、乳腺炎、疮痈肿毒等,并具有很好的疗效。多糖是一类由单糖组成的天然高分子化合物,广泛存在于自然界,是多种中草药的有效成分之一。现代药理表明,多糖具有多种生物活性和功能,如具有免疫调节功能,可作为广谱免疫促进剂[1],也可用于治疗风湿病、慢性病毒性肝炎、癌症等[2-3];还具有抗病毒、抗感染[4]、抗凝血、降血脂[5]、消除氧化自由基[6]等作用。有研究表明,栀子多糖对腹水肝癌细胞和S-180肉瘤细胞具有较好的抑制作用[7]。目前,国内外对山里黄根化学成分的研究报道主要有环烯醚萜类、齐墩果酸醋酸酯、甘露醇、挥发油及豆甾醇类等[8];对栀子果实的研究报道较多,并已有报道研究栀子多糖提取工艺的优化,但对栀子根,即山里黄根中多糖提取的工艺条件报道极少。本研究通过设计单因素试验和正交试验,以多糖含量为指标,采用苯酚-硫酸法,比较影响多糖含量主要因素的主次关系,优化提取条件,希望能为进一步开发利用山里黄根多糖提供数据基础。1试药与仪器1.1原料与试剂山里黄根,采自浙江丽水市莲都区天堂山,经浙江中医药大学药学院中药资源鉴定研究所陈孔荣教授鉴定为茜草科栀子属植物栀子(GardeniajasminoidesEllis.)的干燥根。葡萄糖标准品(批号:201205),购自中国食品药品检定研究院。苯酚(批号:20100906),购自杭州高晶精细化工有限公司。浓硫酸(批号:20120905),购自浙江中星化工试剂有限公司。1.2仪器高速万能粉碎机(浙江屹立工贸有限公司),电子恒温水浴锅(上海科析试验仪器厂),GZX-9140MBE数显鼓风干燥箱(上海博讯实业有限公司医疗设备厂),SHB-循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司),AL104电子分析天平(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司),岛津紫外可视分光光度计(岛津仪器(苏州)有限公司),BL3-120A超声清洗机(上海比朗仪器有限公司),调温电热器(上海苏达实验仪器有限公司)。2方法2.1多糖的提取取干燥山里黄根粉碎,精密称取2.0g,置于50mL的圆底烧瓶中,加入20mL蒸馏水后,浸泡30min,加热煮沸40min后趁热抽滤。将滤液于50mL容量瓶中定容,制成供试品[9]。2.2多糖含量的测定2.2.1检测方法的建立葡萄糖标准溶液的配制:精密称取105下干燥至恒重的葡萄糖标准品50.00mg,加入适量水溶解后,转移至500mL容量瓶中定容,充分摇匀,制得100g/mL的葡萄糖标准溶液备用。最大吸收波长选择:准确量取对照品溶液1.0mL,置具塞试管中,准确加入1.0mL的6%苯酚溶液,摇匀,再准确移取5.0mL浓硫酸溶液,迅速摇匀后,放置5min,置沸水水浴中保持15min,取出后迅速冷却至室温,在190.0~800.0nm进行扫描,选择最大吸收波长,确定最大吸收波长[10]。2.2.2标准曲线的绘制用移液枪分别吸取0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL葡萄糖标准溶液于具塞试管中,加蒸馏水至1.0mL,准确加入1.0mL的6%苯酚溶液,摇匀,再准确移取5.0mL浓硫酸溶液,迅速摇匀后,放置5min,置沸水水浴中保持15min,取出后迅速冷却至室温,在最大吸收波长处测定其吸光度;另以蒸馏水1.0mL,同上做空白对照,用分光光度计在最大吸收波长处测定吸光度,以吸光度对浓度作标准曲线。2.3方法学考察2.3.1精密度试验精密吸取同一供试品溶液1.0mL,按“2.2

参考文献

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