多发性肌炎患者FAS/FASL抗原的表达与外周血淋巴细胞亚群的相关性研究

作者:揭旭日;王小超;黄丹;李红文;吕丽娜;陈红;左瑶 刊名:右江民族医学院学报 上传者:陈武

【摘要】目的分析多发性肌炎(PM)患者FAS/FASL抗原的表达与外周血淋巴细胞亚群的相关性。方法选取17例我院2012年10月~2014年10月接诊的活动期PM患者为研究对象;对照组为非骨骼肌疾病者20例。免疫组化法分别检测两组患者FAS/FASL蛋白质在不同部位的表达,流式细胞仪测定两组外周血CD3+、CD4+、CD8+、CD19+、NK细胞百分率;分析PM患者FAS/FASL抗原的表达与外周血淋巴细胞亚群的关系。结果结果 FAS、FASL抗原在PM肌纤维表面及浸润的淋巴细胞均有较强的表达,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01);CD4+、CD8+T细胞百分比、CD4+/CD8+的比值高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论可能CD4+T细胞介导细胞免疫与FAS/FASL蛋白的促进肌细胞凋亡关系更加密切。

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多发性肌炎(PM)是特发性炎症性肌病的一种,以四肢近心端肌无力为主的骨骼肌非化脓性炎症性疾病。大多数患者伴发自发性肌痛、握痛,生化检查发现血清肌酸激酶(CK)升高,肌电图多出现肌源性改变。骨骼肌活检病理检查,可见肌纤维变性、坏死、肌细胞萎缩和纤维化或被脂肪组织替代[1]。PM/DM的发病可能与病毒感染、遗传因素、体液免疫、细胞免疫、MHC-分子的表达及多种细胞因子有关[2-3],我们在临床工作中发现,PM患者激素治疗好转,但停药易复发,甚至有部分患者应用激素治疗无任何疗效、病情急剧加重,加用甲氨蝶呤、环磷酰胺或吗替麦考酚酯等免疫抑制剂治疗,甚至应用生物制剂CD20单抗治疗,疗效仍不佳,因而有必要对PM患者肌细胞凋亡与体液免疫、细胞免疫的相关性进行研究,为揭示PM肌细12胞凋亡与人体细胞免疫、体液免疫的相关性做出贡献,为临床发现新的有效治疗PM药物提供理论基础。1资料与方法1.1一般资料选取我院2012年10月~2014年10月接诊的PM患者为研究对象,诊断均符合1975年Bohan/Peter关于皮肌炎的诊断标准[4],均为活动期患者。对照组为非骨骼肌疾病者,主要为四肢外伤需手术治疗的排除合并骨骼肌慢性疾病者,均于研究开始前签署知情同意书。研究组,男性7例,女性10例,平均年龄(41.7611.84)岁;对照组,男性10例,女性10例,平均年龄(42.158.13)岁;所有研究对象均不合并严重的心、肝、肾等器质性疾病及免疫性疾病,且8周内未服用免疫抑制剂。两组在年龄、性别构成比等方面的差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性。1.2研究方法1.2.1组织活检制备方法所有研究对象均取上肢或下肢近心端肌纤维5g,经10%福尔马林固定,常规石蜡包埋,待检。1.2.2淋巴细胞亚群检测方法所有研究对象均于清晨空腹抽取静脉血5ml,采用我院流式细胞仪测定其外周血CD3+、CD4+、CD19+、CD8+、NK细胞细胞百分比及辅助性T细胞和抑制性T细胞比值,并做组间比较,分析其与病情活动情况的关系,具体操作方法按实验室规程进行。1.3免疫组化检测方法1.3.1切片制作行石蜡包埋后制成4m石蜡切片3张,行免疫组化染色。1.3.2抗体检测兔抗人FAS和FASL多克隆抗体、LSAB药盒购自上海卓康生物科技有限公司,实验过程:采用结合微波脱交联的LSAB法,所有实验步骤均按试剂盒实验说明书进行。具体如下:4m切片载于玻片上,在56孵箱中干燥过夜,二甲苯梯度酒精水化,置标本于枸橼酸溶液中,于微波炉中处理8min后取出,室温下自然冷却,分别在蒸馏水及PBS溶液中洗两次,滴3%H2O2及DAKO药盒阻断液处理8min,滴10%正常牛血清于37室温放置10min,阻断非特异性蛋白结合点,之后PBS液冲洗3次,滴加稀释的一抗,其中FAS抗原在室温中孵育30min,FASL在4湿盒中过夜,再经PBS洗3次,滴加标记的多聚HRP,于室温放置25min后PBS冲洗3次,滴加DAB液,显色后用苏木素复苏。结果判断:在标本染色过程中,加入由卓康生物科技有限公司提供的切片作为阳性对照(+++),用PBS替代一抗作为阴性对照。根据肌肉纤维着色的深浅及着色细胞占总细胞数的百分比,将其分为4个等级:-:无阳细胞;+:阳性细胞<20%;++:阳性细胞占20%~50%;+++:阳性细胞>50%。1.4统计学方法所有数据均采用SPSS15.0统计学软件进行分析,两组构成比资料采用秩和检验分析,计量资料采用两样本均数比较的t检验分析,以P<0.05为差异有统计学意义。2结果2.1病理形态学改变PM肌肉

参考文献

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