MCHR1基因shRNA真核表达载体的构建及鉴定

作者:赵志武;师磊;陈显久;王君实;马敏;燕炯 刊名:中国生化药物杂志 上传者:胡芳

【摘要】目的构建有效针对小鼠黑色素浓集激素受体1(melanin-concentrating hormone receptor 1,MCHR1)的shRNA(small hairpin RNA)真核表达载体。方法设计合成3条小鼠MCHR1基因的shRNA序列以及1条无同源性的shRNA序列作为阴性对照,与质粒重组构建sh-MCHR1干扰载体,并进行菌液PCR和DNA测序鉴定;脂质体法转染小鼠3T3-L1细胞后观察MCHR1 mRNA和蛋白表达的变化。结果经菌液PCR及DNA测序鉴定表明各shRNA载体构建成功;转染3T3-L1细胞后,与空载体组相比,阴性对照组MCHR1 mRNA和蛋白的表达均无明显差异,但实验组3种干扰载体均能显著抑制MCHR1 mRNA和蛋白的表达(P<0.05),且3种载体的抑制程度有一定的差异,以sh-MCHR1-1载体沉默效果最佳。结论 sh-MCHR1干扰载体构建成功,为进一步探究MCHR1与肥胖症之间的关系奠定了实验基础。

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MCHR1 基因 shRNA 真核表达载体的构建及鉴定 赵志武1,师磊1,陈显久2,王君实1,马敏1,燕炯1Δ ( 1. 山西医科大学 公共卫生学院,山西 太原 030001;2. 山西医科大学 基础医学院,山西 太原 030001 ) [摘要] 目的 构建有效针对小鼠黑色素浓集激素受体 1( melanin-concentrating hormone receptor 1,MCHR1) 的 shRNA( small hairpin RNA) 真核表达载体。方法 设计合成 3 条小鼠 MCHR1 基因的 shRNA 序列以及 1 条无同源性的 shRNA 序列作为阴性对照,与质粒重组构建 sh-MCHR1 干扰载体,并进行菌液 PCR 和 DNA 测序鉴定; 脂质体法转染小鼠3T3-L1 细胞后观察 MCHR1 mRNA 和蛋白表达的变化。结果 经菌液 PCR 及 DNA 测序鉴定表明各 shRNA 载体构建成功; 转染 3T3-L1 细胞后,与空载体组相比,阴性对照组 MCHR1 mRNA 和蛋白的表达均无明显差异,但实验组 3 种干扰载体均能显著抑制 MCHR1 mRNA 和蛋白的表达( P < 0. 05) ,且 3 种载体的抑制程度有一定的差异,以 sh-MCHR1-1 载体沉默效果最佳。结论 sh-MCHR1 干扰载体构建成功,为进一步探究 MCHR1 与肥胖症之间的关系奠定了实验基础。 [关键词] 黑色素浓集激素受体1; RNA 干扰; shRNA 载体; 3T3-L1 前脂肪细胞 [中图分类号] R153 [文献标识码] A [文章编号] 1005 -1678( 2015) 02 -0014 -04 作者简介: 赵志武,男,硕士在读,研究方向: 公共卫生,E-mail: 842294911 @ qq. com ; 燕炯,通信作者,男,副教授,硕士生导师,研究方向: 营养相关疾病分子学,E-mail: yanjiong@ 126. com。 Construction and identification of shRNA recombinant plasmids targeting MCHR1 gene ZHAO Zhi-wu1,SHI Lei1,CHEN Xian-jiu2,WHANG Jun-shi1,MA Min1,YAN Jiong1Δ ( 1. School of Public Health,Shanxi Medical University,Taiyuan 030001,China; 2. School of Basic Medical Sciences,Shanxi Medical University,Taiyuan 030001,China) [Abstract] Objective To construct effective small hairpin RNA( shRNA) recombinant plasmids targeting mouse melanin-concentrating hormone receptor 1( MCHR1) gene. Methods Three shRNA sequences targeting mouse MCHR1 gene and one negative control were designed,synthesized and then recombined with plasmid. The shRNA recombinant vectors were dete

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