腺苷预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤后VEGF的表达

作者:尉娜;王建平;申小龙;谭军 刊名:中风与神经疾病杂志 上传者:刘艳

【摘要】目的通过观察腺苷预处理后大鼠局灶性脑缺血再灌注区脑组织的病理结构、脑梗死面积及血管内皮生长因子(VEGF)的表达,探讨腺苷预处理诱导脑缺血耐受的可能作用机制。方法制作大鼠脑缺血再灌注损伤模型。60只SD大鼠随机分为3组:假手术组(F组)、缺血再灌注组(IR组)、腺苷预处理组(AP组),再按缺血再灌注后不同时间把各组随机分成4个亚组(每亚组5只大鼠)。通过TTC染色观察脑梗死体积,并应用免疫组化法检测各组大鼠脑组织VEGF的表达。结果 (1)TTC染色正常脑组织呈鲜红色,梗死区脑组织呈苍白色,并且随着再灌注时间的延长可见梗死区扩大,腺苷预处理组的脑梗死体积小于缺血再灌注组。(2)F组可见少量VEGF阳性表达,IR组和AP组在脑缺血再灌注后2 h开始出现VEGF阳性表达的细胞数量增多,24 h达到高峰,72 h下降,AP组在6 h、24 h VEGF阳性表达比IR组增强(P均<0.05),在72 h时AP组VEGF阳性表达较IR组减少(P<0.05)。结论腺苷预处理能够进一步增强大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后VEGF的表达;VEGF的表达增加可能是腺苷预处理诱导脑缺血耐受和产生神经保护作用的分子机制之一。

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缺血性脑血管疾病是一类常见病、多发病,其致残率与病死率都很高,极大地危害着人们的身体健康,而脑缺血同时也是多种脑损伤疾病共同的病理生理基础,如何减轻脑缺血后的神经损伤、提高脑组织对缺血的耐受,一直是临床预防和治疗缺血性脑血管疾病的重点和难点。脑缺血耐受的提出为防止脑缺血再灌注损伤开拓了新的研究领域,缺血预处理对大脑的保护作用对研究内源性神经保护机制和神经保护治疗方法提供了新的研究方向。然而在实际的临床工作中在患者发生脑梗死之前对大脑进行短暂的缺血预处理是不现实的,因此临床工作中更多应该选择药物进行预处理,本实验中我们选用腺苷作为预处理的药物。用腺苷进行预处理后制备大脑中动脉脑缺血模型,再灌注后选择不同时间点通过HE染色后光镜下观察脑缺血再灌注损伤区域脑组织的病理变化,通过TTC染色观察脑梗死体积,运用免疫组织化学法检测血管内皮生长因子(VEGF)的表达,探讨腺苷预处理在脑缺血再灌注损伤中可能的保护机制,为临床应用腺苷预防和治疗缺血性脑血管疾病提供理论依据,同时为减轻脑梗死损伤提供一条治疗思路。1材料和方法1.1实验动物及分组健康SD大鼠60只(雄性,体重250~300g)由新乡医学院实验动物中心提供。随机分为假手术组(F组)、缺血再灌注组(IR组)、腺苷预处理组(AP组)共3组,这3组根据再灌注时间随机分为2h、6h、24h、72h4个亚组,每亚组5只。F组和IR组大鼠于手术前3d开始腹腔注射生理盐水,每天一次,每次2ml;AP组大鼠于手术前3d开始腹腔注射腺苷注射液,剂量为1.5mg/kg,生理盐水稀释到2ml,每天一次。1.2主要试剂腺苷注射液(沈阳光大制药有限公司,批准文号为国药准字H20030320、规格为6mg/2ml);VEGF多克隆抗体、即用型SABC免疫组化试剂盒、DAB显色试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司);NikonMODELYS100显微镜(Ni-kon);照相显微镜HPIAS-2000显微图像定量分析系统(郑州太阳电子科技公司)。1.3实验方法1.3.1大鼠局灶性脑缺血再灌注模型的建立本实验采用尼龙线栓塞法制备大鼠大脑中动脉阻塞(middlecerebralarteryocclusion,MCAO)模型[1,2],并加以改良。将SD大鼠腹腔注射10%水合氯醛溶液(3ml/kg)麻醉成功后,在颈正中线处纵向切开皮肤,分离右侧颈总动脉(commoncarotidartery,CCA),向近端分离出颈外动脉(externalcarotidartery,ECA)和颈内动脉(internalcarotidartery,ICA)。结扎并离断ECA。ICA分离至颅底,将其分支结扎离断,仅保留ICA入颅的主干通畅。用动脉夹暂时夹闭ICA和CCA,在ECA残端剪一小口,插入准备好的尼龙线,到达大脑中动脉(middlecerebralartery,MCA)的起始部,插入使其到达大脑前动脉(anteriorcerebralartery,ACA),进入深度约18mm,阻断MCA血流。在ECA残端插线处打结固定尼龙线,打开动脉夹,将尼龙线尾端用黑色记号笔涂黑后留于皮肤外1cm,消毒并逐层缝合。阻断MCA2h后,轻轻向外抽拉尼龙线至ECA主干,使大脑动脉Willis环和MCA恢复血供,保持体温至清醒。大鼠术后单笼饲养,自由饮水和进食,并给予抗生素及补液治疗。1.3.2切片制备各组大鼠按照时间点取出大脑至培养皿中,切取视交叉前后各2mm厚的脑组织,放入4%多聚甲醛磷酸盐缓冲溶液(pH=7.4)中固定24h后,脱水透明,石蜡包埋切片,用于HE染色及VE

参考文献

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