低氧诱导因子-1α和炎症诱导酶在炎症性肠病中的表达及意义

作者:许春梅;董卫国;余保平;罗和生;于皆平 刊名:临床消化病杂志 上传者:王建中

【摘要】目的探讨低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、参与炎症的重要诱导酶-环氧合酶-2(COX-2)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白在炎症性肠病中的表达及作用。方法采用免疫组织化学方法检测60例甲醛固定、石蜡包埋的炎症性肠病活检蜡块标本以及10例正常结肠黏膜组织中HIF-1α、COX-2、iNOS蛋白表达情况。结果HIF-1α、COX-2、iNOS蛋白在炎症性肠病中表达均明显增加,分别与正常组比较有显著性差(P<0.01);COX-2(溃疡性结肠炎:r=0.690,克罗恩病:r=0.723,P<0.05)和iNOS蛋白水平(溃疡性结肠炎:r=0.625,克罗恩病:r=0.782,P<0.05)分别与HIF-1α蛋白水平呈正相关。结论HIF-1α、COX-2、iNOS蛋白均参与了炎症性肠病的发生和发展,HIF-1α可能是COX-2、iNOS基因表达中的一个重要调节者。

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炎症性肠病(IBD)是一种慢性非特异性肠道炎症性疾病,包括溃疡性结肠炎(UC)和克罗恩病(CD)。其病因和发病机制仍不清楚,目前认为主要由环境、遗传、免疫反应异常而导致慢性炎症的发生。其中产生过量的细胞因子和炎症介质对组织的损伤作用是炎症性肠病发病机制中的一个重要方面,然而这些细胞因子和炎症介质的调控及释放机缸目前仍不清楚川。低氧诱导因子一1。(HIF一la)作为基因转录的核调节因子,是低氧适应和病理反应中的一个特异中介因子。研究发现,HIF一la被激活后,结合类似EPo3’一增强子序列中5,~TAGGn芜T一’,可以诱导许多低氧反应基因,如环氧合酶一(COX一)、诱导型一氧化氮合酶(iNos)基因的表达[’]‘,大量资料表明,eox一、iNoS、一氧化氮(NO)作为重要的炎症介质参与炎症性肠病的发生和发展[’,3]。本实验旨在观察HIF一1。、炎症诱导酶一COxZ、iNoS在炎症性肠病中的表达情况以及初步探讨HIFOI。与COX一和iNoS基因表达的关系。1资料和方法1.1研究对象6()例IBD(47例UC,13例CD)标本取自武汉各大医院病理科1990年1月一2003年12月活检石蜡标本,均为经过临床、内镜、大便培养、病理学、影像学等确诊的病例标本。正常对照组10例为肠癌手术切除的正常残端标本。47例UC中男34例,女13例;l3例CD中男9例,女4例;47例’UC患者的平均年龄为37岁,13例CD患者的平均年龄为39岁。1.2试剂兔抗人HIF一1。、兔抗人COX一2、兔抗人洒OS多克隆抗体均购自武汉博士德生物工程公司,抗体工作浓度分别为1:so、1:50、1:so。S一P试剂盒为美国MAx1M公司产品,购自福州迈新公司。1.3方法切片作常规HE染色外,余作免疫组化染色,即石蜡切片脱蜡水化,采用构椽酸一微波一SP法,DAB显色,苏木精复染,具体操作按SP试剂盒说明书进行。用PBS替代一抗作为阴性对照,余步骤相同。1.4染色结果的判断HIF一la蛋白以细胞核或胞浆内有棕黄色颗粒为阳性;COX一2和iNOS蛋白以细胞浆或核膜上出现棕黄色为阳性细胞。每张切片在400倍显微镜下随机选定5个视野,采用全自动图像分析仪、HPIAS一以x图像分析软件,分别扫描记录阳性细胞表达百分数,取其均数。1.5统计学处理数据以无土,表示。多组间比较用单因素方差分析。组间比较用‘检验。相关分析采用直线相关回归分析。尸<0.05代表结果有显著性差异。采用SPSS11.5统计软件进行分析。2结果2.1HIF一la蛋白、COX一蛋白和iNOS蛋白的表达情况HIF一la在正常的肠组织中不表达或者是很微弱的表达,而在IBD的肠腔和腺体的上皮细胞、血管的内皮细胞、基质的结缔组织细胞、肠组织的炎性细胞中表达明显增强。特征为胞浆或胞核呈黄色或棕褐色;COX一和iNOS蛋白在正常肠组织赫膜中几乎都不表达,而在IBD组织的上皮细胞、血管的内皮细胞、结缔组织细胞、肠组织的炎性细胞中表达明显增强。经计算机图像分析,HIF一la蛋白、Cox一蛋白和iNos蛋白在UC、CD和正常肠勃膜组织中表达阳性百分率见表1。表1各实验组中HW一1。、Cox一和训Os细胞表达阳性率的比较【无士:,%)组别nHIF一la表达阳性率正常结肠勃膜组织溃疡性结肠炎克罗恩病10472.21土1.4657.07士13.8359.27士8.59.COXZ表达阳性率1.89士1.3656.74土9.6759.34土4.12.iNOS表达阳性率1.89士1.2756.97土10.4358.38士8.55.与正常组比较,尸<0.0

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