人附睾蛋白4基因表达下调对卵巢癌细胞生物学行为的影响

作者:周磊;肖然;陈颖;张菁;卢仁泉;郭林 刊名:中华病理学杂志 上传者:朱楠

【摘要】目的 探讨人附睾蛋白4(HE4)基因表达下调对卵巢癌细胞增殖、黏附以及侵袭能力的影响.方法 构建含HE4 shDNA的重组质粒,并将其转染卵巢癌细胞系SKOV3细胞,RNA干扰后,通过即时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)、Western blot等测定HE4表达下调情况;同时利用平板克隆形成实验、细胞黏附实验、测定稳定转染细胞的侵袭力改变等方法,比较分析HE4相关的生物学效应.结果 Western blot以及qRT-PCR结果均提示HE4干扰重组质粒构建成功,稳定转染SKOV3细胞后能显著抑制HE4基因的表达.体外实验显示,HE4表达下调的细胞侵袭能力明显下降(P<0.05),黏附率明显下降到27.3%,而增殖能力较转染前无明显变化.结论 所构建的HE4干扰重组表达载体能有效抑制HE4基因表达,而HE4表达下调对卵巢癌的细胞黏附和侵袭能力降低.

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中华病理学杂志 2013年 10月第 42卷第 lO期 Chin J Pathol,October 2013,Vo1.42,No.10 ·687· . 论 著 .实 验 病 理 学 . 人附睾蛋 白 4基 因表达下调对卵巢癌细胞 生物 学行 为 的影 响 周磊 肖然 陈颖 张菁 卢仁泉 郭林 【摘要】 目的 探讨人附睾蛋白4(HFA)基因表达下调对卵巢癌细胞增殖、黏附以及侵袭能力 的影响。方法 构建含 HE4 shDNA的重组质粒,并将其转染卵巢癌细胞系 SKOV3细胞,RNA干扰 后,通过即时定量聚合酶链反应(qRT—PCR)、Western blot等测定 HE4表达下调情况;同时利用平板克 隆形成实验 、细胞黏附实验 、测定稳定转染细胞的侵袭力改变等方法,比较分析 HE4相关的生物学效 应。结果 Western blot以及 qRT—PCR结果均提示 HE4干扰重组质粒构建成功,稳定转染 SKOV3细 胞后能显著抑制 HE4基因的表达。体外实验显示 ,HE4表达下调的细胞侵袭能力明显下降 (P< 0.05),黏附率明显下降到 27.3%,而增殖能力较转染前无明显变化。结论 所构建的HFA干扰重组 表达载体能有效抑制 HE4基因表达,而 HFA表达下调对卵巢癌的细胞黏附和侵袭能力降低。 【关键词】 卵巢肿瘤; 肿瘤标记 ,生物学; RNA干扰 Eect of down-regulation of HE4 gene expression on biologic behavior of ovarian cancer cells ZHOU Lei,X1AO Ran,CHEN Ying,ZHANG ring,LU Ren—quan,GUO Lin.Department of Clinical Laboratory Cancer Center,Fudan University;Department of Ontology,Shanghai Medical College,Fudan University, Shanghai 200032. ina Corresponding author:LU Ren—quan,E—maiZ:lurenquan66@ hotmaiL com 【Abstract】 Objectlve To investigate the effects of HE4 gene knockdown on the proliferation, adhesion and invasion of the ovarian cancer cells SKOV3. M ethods The knockdown of HE4 gene was performed by RNAi technology.The recombinant plasmids(pSUPER-HE4 shDNAs)were constructed and transfected into human ovarian cancer cells SKOV3. HE4 expression was then identified by real—time PCR and Western blot analysis. The invasion and adhesion ability of transduced cells were determined. In addition,cell proliferation and growth were analyzed by colonies

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